有囊泡相关技术问题请在该贴留言！

danielle

我发现我在1 ml PBS里加3-4 ul tween20，再上NTA测量，发现有很高浓度的颗粒，粒径可能小于100 nm，你们有人遇到过这个情况吗？这件事情的起因是我加了15% tween-20破坏外泌体后，稀释后上NTA，发现颗粒浓度还升高了。

psyerLD

Hzangs老师，有几个问题想请教您，万分感谢！！
1.外泌体做电镜的话需要做冷冻电镜吗？
2.外泌体提取出来之后大概可以在-80保存多久还能保持活性？如果提取出来先在4°放置两天再放到-80保存会会电镜或NTA鉴定有影响吗？
3，我用含有5%血清替代物的400ml细胞上清液提取外泌体，最后用100ulPBS重悬，检测NTA发现一点囊泡都没有，但是第一次同样的方法提取出来的200ml不含血清替代物的细胞上清，50u重悬后可以检测出来大约10的7次方个囊泡数，会是因为血清替代物的影响吗？

hzangs

psyerLD 发表于 2019-11-19 13:26
Hzangs老师，有几个问题想请教您，万分感谢！！
1.外泌体做电镜的话需要做冷冻电镜吗？
2.外泌体提取出来之 ...

1、 负染即可。如果有条件 冷冻电镜也OK
2、-80可以长期保存，几个月没问题。 冷冻过的样品 可能会存在抱团   粒径增大等情况。
3、不是，大概率你都收丢了。 一般检测的囊泡数目 应该在10^9左右。你这比大家的数据低了2个数量级

psyerLD

hzangs 发表于 2019-11-19 13:51
1、 负染即可。如果有条件 冷冻电镜也OK
2、-80可以长期保存，几个月没问题。 冷冻过的样品 可能会存在抱 ...

谢谢hzangs老师！！我看了您在杭州的那个课件，里面写了超离最后一步不要倒出上清，意思就是这一步操作的时候我用移液管将上清吸走吗？

hzangs

psyerLD 发表于 2019-11-19 14:52
谢谢hzangs老师！！我看了您在杭州的那个课件，里面写了超离最后一步不要倒出上清，意思就是这一步操作的 ...

是的，

18331131398

hzang老师您好，我想问一下，我是用植物提取的外泌体，一直没找到鉴定蛋白的marker,只做了电镜和NTA，不知道蛋白这块该怎么鉴定，希望老师指导下

hzangs

18331131398 发表于 2019-11-20 09:05
hzang老师您好，我想问一下，我是用植物提取的外泌体，一直没找到鉴定蛋白的marker,只做了电镜和NTA，不知 ...

植物方面，我关注的很少。一般认为  植物方面释放的 只能叫做囊泡，不叫外泌体。 你可以参考一下相关的文章  看看他们怎么鉴定的。  植物蛋白跑WB  比较难， 如果其他论文也没有WB鉴定，你可以考虑不做这个实验。

18331131398

hzangs 发表于 2019-11-20 09:57
植物方面，我关注的很少。一般认为  植物方面释放的 只能叫做囊泡，不叫外泌体。 你可以参考一下相关的文 ...

好的，谢谢老师

psyerLD

hzangs 发表于 2019-11-19 18:54
是的，

好的！谢谢大神！

hollychao

hzangs大神好！我的实验是比较提出来的外泌体内的蛋白含量差异，用Elisa来做，想请问hzangs大神，
1.在elisa前用什么来裂解外泌体比较好呢？用M-PER还是RIPA加蛋白酶抑制剂呢？我是小白所以不太懂
2.用试剂盒提出来的外泌体肯定会有杂蛋白存在，我怎样确保杂蛋白不会影响后面的elisa结果呢？是不是使用蛋白酶k？
谢谢！