吉林长春+急求Beckman SW 41 Ti 离心管+

好时之梦

hzangs 发表于 2015-9-16 15:44
有些paper里说 高浓度的exosomes可以在PBS里重悬后放在4° 保存1星期左右，也有paper说可以-80长时间保存 ...

你用超离做过血清吗，据你所知，做血清要不要用PBS稀释啊

hzangs

好时之梦 发表于 2015-9-16 16:10
你用超离做过血清吗，据你所知，做血清要不要用PBS稀释啊

那边实验室所有实验用的exosomes都是现用现做。我一般最多把exosomes放在4° 48小时，超过48小时的我就用了。

我只用超离制备过exosomes-free FBS ，没有稀释，直接超离过夜。没有研究过血清中的exosomes

好时之梦

超离过夜？细胞培养上清超离时需要多长时间啊，有的文献说70min，有的说2h。

hzangs

好时之梦 发表于 2015-9-16 17:32
超离过夜？细胞培养上清超离时需要多长时间啊，有的文献说70min，有的说2h。 ...

去除血清中的exosomes 通常需要超离过夜。 细胞培养上清 70min即可

hzangs

还需要我帮你分样品中exosomes么？

好时之梦

hzangs 发表于 2015-9-16 22:00
还需要我帮你分样品中exosomes么？

我明天做一下超离，看看电镜。有没有特别需要注意的地方，大师给指点一下呗！

好时之梦

好时之梦 发表于 2015-9-16 22:12
我明天做一下超离，看看电镜。有没有特别需要注意的地方，大师给指点一下呗！ ...

我手头只有两个离心管，希望能有个好结果。

好时之梦

好时之梦 发表于 2015-9-16 22:12
我明天做一下超离，看看电镜。有没有特别需要注意的地方，大师给指点一下呗！ ...

长春——上海——长春，太麻烦了，我先做个超离看看吧！

hzangs

好时之梦 发表于 2015-9-16 22:16
长春——上海——长春，太麻烦了，我先做个超离看看吧！

好的。  超离的时候注意一些，exosomes贴壁不是很紧，量会比较小，大概成白色到淡黄色，注意不要在吸上清的时候给吸走了就好。别的没有什么需要注意的。  

好时之梦

hzangs 发表于 2015-9-16 23:22
好的。  超离的时候注意一些，exosomes贴壁不是很紧，量会比较小，大概成白色到淡黄色，注意不要在吸上清 ...

我今天把血清等倍稀释后超速离心了2h，未见明显沉淀，但是离心管底有一层模糊的东西。我怕把外泌体弃掉，留了大约100ull的溶液，用PBS重悬准备明天离心70min看看。