qEV分离柱 - 实战试用报告

hzangs

丝瓜 发表于 2015-10-28 12:10
是啊，qEV主要是很纯，就是算起来花费还是太高了。我们的离心机用的是我们这边其他实验室的，主要是因为 ...

没有尝试过加蔗糖垫，因为我并不研究exosomes的性质， 我只要保证自己拿到的exosomes纯度可以用来研究它的功能和作用机制就够了  o(╯□╰)o

onlyrush

hzangs 发表于 2015-10-28 11:52
个人认为，qEV这一类 以凝胶排阻层析为基础的分离柱，它的主要优势在于可以拿到很纯的 品质可以和超速离 ...

对于这种层析方式来说，和exosomes类似大小的颗粒如病毒粒子应该也和exosomes同时洗脱了吧

hzangs

onlyrush 发表于 2015-10-28 17:22
对于这种层析方式来说，和exosomes类似大小的颗粒如病毒粒子应该也和exosomes同时洗脱了吧 ...

理论上讲，是的。 但是超离也存在这样的问题，毕竟 我们超离浓缩病毒的时候 和分离exosomes 基本用的是很类似的protocol

kasangzc

想请教一下 用超离的方法时可不可以用超滤将上清浓缩一下呢？

hzangs

kasangzc 发表于 2015-10-28 21:11
想请教一下 用超离的方法时可不可以用超滤将上清浓缩一下呢？

没有尝试过，理论上应该可以的。

onlyrush

hzangs 发表于 2015-10-28 21:16
没有尝试过，理论上应该可以的。

超滤浓缩和0.22um过滤是否会对exosomes造成损伤或者降低得率呢？

kasangzc

onlyrush 发表于 2015-10-29 09:28
超滤浓缩和0.22um过滤是否会对exosomes造成损伤或者降低得率呢？

应该是会有损失的,但是浓缩之后可以降低工作量啊

hzangs

onlyrush 发表于 2015-10-29 09:28
超滤浓缩和0.22um过滤是否会对exosomes造成损伤或者降低得率呢？

一些protocol类的文章对这个问题进行过分析，得出的结论是可能跟不同的细胞系、不同的超滤材料有关系。 现在一些大牌子比较好的超滤管和滤器的多孔材料都是低蛋白吸附的。 个人认为 超滤浓缩或者过0.22的滤器肯定会有一些损失，但损失量有多大 并不好确定。 目前看，可能损失不至于影响太大

onlyrush

hzangs 发表于 2015-10-29 11:56
一些protocol类的文章对这个问题进行过分析，得出的结论是可能跟不同的细胞系、不同的超滤材料有关系。  ...

请问您超滤的孔径一般选择多少？ 10KD？30KD？

wxhljq

前天用了一次qEV柱，分离的血清外泌体，电镜下看还不错。今天本想再来一次，但是透过灯光看柱子，内部有10-15个气泡一样的孔洞。因为第一次做之前没细看，不知道是用过之后产生的，还是之前就有，前天做的时候肯定是没有漏气进去的。楼主柱子有没有这情况？？