外泌体RNA提取

wjy · 发表于 2016-7-29 16:16:35

大家提取的外泌体总RNA 有跑过RNA电泳吗？第一条是DNAmarker(原谅没有RNAmarker),第二条是外泌体RNA(啥也没有，),第三条是细胞的RNA有18s和28s，大家跑都这样吗

hzangs · 发表于 2016-7-29 17:24:32

wjy 发表于 2016-7-29 16:09
想像你你咨询一下，你外泌体提取的RNA有跑RNA电泳吗？有18s和28s的条带吗？我和细胞同时提取的总RNA,细胞 ...

外泌体中是不会有18s 和28s的条带的。 RNA电泳是检测RNA灵敏度非常低的手段。你提取出的那点外泌体RNA 根本不足以让你在胶里看到。

wjy · 发表于 2016-7-29 17:29:32

恩恩，对，外泌体是没有rRNA,跑电泳没有的原因是RNA量太低了是吗？检测不到是吗？那怎么检测那？那细胞组从电泳上看应该是18S和28s吗？

wjy · 发表于 2016-7-29 17:31:00

hzangs 发表于 2016-7-29 17:24
外泌体中是不会有18s 和28s的条带的。 RNA电泳是检测RNA灵敏度非常低的手段。你提取出的那点外泌体RNA ...

恩，对，外泌体是没有rRNA,跑电泳没有的原因是RNA量太低了是吗？检测不到是吗？那怎么检测那？那细胞组从电泳上看应该是18S和28s吗？你的外泌体提取的总RNA,怎么检测那？

hzangs · 发表于 2016-7-29 21:19:12

wjy 发表于 2016-7-29 17:31
恩，对，外泌体是没有rRNA,跑电泳没有的原因是RNA量太低了是吗？检测不到是吗？那怎么检测那？那细胞组从 ...

外泌体提取的总RNA 如果有条件直接上agilent2100。没有条件的话一般选取一两个比较常见的基因跑个qPCR看看，比如GAPDH之类的基因。

完颜云裳 · 发表于 2016-8-6 17:13:33

这些问题对新手来说太有帮助了，我还想问一下大家提的外泌体RNA的吸收峰值是多少啊？我们的老是在270nm处，浓度1.5-1.6。

萤火虫 · 发表于 2016-11-9 10:56:23

你们有提取完外泌体之后不用PBS重悬直接用TRIZOL提取的吗？我用的是250ul的血清提取的外泌体，应该加多少量的TRIZOL比较合适呢，求指导，谢谢！

wxy · 发表于 2017-2-13 21:33:58

hzangs 发表于 2016-4-1 19:33
1ml trizol就可以。但是体系含水量高，你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离 ...

你好，关于加入异丙醇后再加百分之10的醋酸钠，这一步能不能详细的说一下呢，最好是步骤的那种，十分感谢
！

dancing · 发表于 2017-4-13 15:55:45

hzangs 发表于 2016-4-1 19:33
1ml trizol就可以。但是体系含水量高，你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离 ...

请问没有加pbs的外泌体里面也是用1mltrizol吗

tianjing0312 · 发表于 2018-8-22 11:06:44

请问提rna需要多少外泌体的量呢？我是做的细胞上清，可以大概告诉我需要多少上清或者外泌体particle 或者 ug数？

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