求助，从exosome提出RNA后的qPCR.

惜名

kadak007 发表于 2015-9-7 09:53
惜名版主，你有没有用过天根的miRNA荧光定量检测试剂盒？想请教下 上游引物设计问题...... ...

用过  但是效果并不好。。。
引物是公司帮忙设计的   我没设计过引物

惜名

kadak007 发表于 2015-9-7 09:53
惜名版主，你有没有用过天根的miRNA荧光定量检测试剂盒？想请教下 上游引物设计问题...... ...

用过  但是效果并不好。。。
引物是公司帮忙设计的   我没设计过引物

kadak007

惜名 发表于 2015-9-7 10:06
用过  但是效果并不好。。。
引物是公司帮忙设计的   我没设计过引物

唉，感觉内心很忐忑呀，先硬着头皮试试吧

huan1989111007

惜名 发表于 2015-9-7 10:06
用过  但是效果并不好。。。
引物是公司帮忙设计的   我没设计过引物

不好是怎样的？这方面太坑...

huan1989111007

kadak007 发表于 2015-9-7 10:11
唉，感觉内心很忐忑呀，先硬着头皮试试吧

最主要的是提取exosome的量，其次是逆转录的试剂盒。祝好运...

huan1989111007

kadak007 发表于 2015-9-7 10:11
唉，感觉内心很忐忑呀，先硬着头皮试试吧

最主要的是提取exosome的量，其次是逆转录的试剂盒。祝好运...

huan1989111007

kadak007 发表于 2015-9-7 09:53
惜名版主，你有没有用过天根的miRNA荧光定量检测试剂盒？想请教下 上游引物设计问题...... ...

miRNA 一般有通用引物和特异性引物的。通用引物一般试剂盒中有，特异性引物自己购买即可。差别不大。

kadak007

huan1989111007 发表于 2015-9-7 21:50
miRNA 一般有通用引物和特异性引物的。通用引物一般试剂盒中有，特异性引物自己购买即可。差别不大。 ...

谢谢啊，准备近期试试，希望有结果...

木瓜31

大家外泌体miRNA定量做得如何呢？我之前根据文献选了一个miRNA(miR-16)作为内参，但是似乎不太理想。。又在提取RNA时加入外参，但样本之间外参PCR的CT值并不十分接近。这是说明样本间RNA提取效率、RT-PCR的操作有问题，一致性差呢？还是无需在意，直接用(CT目的基因-CT外参）进行相对定量呢？个人觉得如果RT-PCR能够保证一致性较可（反转录前加入另一个spike in)而RNA提取效率不一致，即使样本RNA有损失，那是不是可以认为各种RNA均减少（外参与目的基因一起减少）？？求交流及赐教~

木瓜31

wanghx_85 发表于 2015-6-12 08:52
我问过相关的技术支持，现在做exo的miR没有公认的内参（也就是说U6是不行滴），设置外参的目的是为了说明 ...

请问你现在如何定量呢？外参吗？