菜鸟求助 细胞培养上清SBI 试剂外泌体分离

六月の雪

daidiu2003 发表于 2015-5-18 22:34
请问“用SBI公司的Exoquick-TC分离肿瘤细胞培养上清中的外泌体”，Exoquick-TC有说明书吗？是按着说明书操 ...

https://www.systembio.com/micror ... exosomes/literature
SBI公司官网有说明书下载

bobo

muzi.csu 发表于 2015-5-12 15:54
我买的是3KD的  15ml的超滤管。exo-free好像是将近2000元买的小规格

请问，这个超滤管是什么牌子的呢？用多少转数离心呢？离心后用什么重悬呢？为什么选择3KD的呢？

evomicscience

PEG-based exosome isolation method is not accepted by most of researchers in this year ISEV meeting yet. Actually, rejected! Most is seeking other products. The problem of this kind of method is that the both purity and yield are too low.

yy8651

muzi.csu 发表于 2015-5-12 15:54
我买的是3KD的  15ml的超滤管。exo-free好像是将近2000元买的小规格

请问您是如何浓缩的呢？能不能分享一下？

freeman811

我是这样操作的：4℃, 3000g×15min,去除细胞及碎片；然后将上清移入Amicon-Ultra-15超滤管（Millipore公司），4℃，4000g×30min；吸取内网中200ul超滤液，再加入等体积exoquick提取液，混匀后放置过夜，离心后会有大量沉淀。

yy8651

freeman811 发表于 2015-6-22 23:25
我是这样操作的：4℃, 3000g×15min,去除细胞及碎片；然后将上清移入Amicon-Ultra-15超滤管（Millipore公司 ...

你的超滤管是多大的？100KD？
超滤30min不会把所有液体都滤掉吗？
你没有按照说明书的比例，而是按照1:1的比例加的提取试剂是吗？
谢谢

freeman811

yy8651 发表于 2015-6-23 09:53
你的超滤管是多大的？100KD？
超滤30min不会把所有液体都滤掉吗？
你没有按照说明书的比例，而是按照1:1 ...

超滤管是30KD，只要没有滤膜破损，超滤管具有残液保留功能，保证最终滤液的量在200ul左右，不会都滤掉。
超滤液是按照等比例加提取液，一是文献中也这么做；二是我也试过按照5：1加提取液，沉淀没有1：1的多，而且5：1去提取的exosome用Nono系统测量的粒径平均在500-600nm左右，且较为分散，感觉5：1不能完全提取。但1：1提取的我也没测过。供参考！

梦想照进现实

宝莲 发表于 2015-4-23 19:18
我用life的试剂盒，20ml无血清的细胞培养上清提取也没有沉淀，做电镜可以看到少量外泌体。 ...

你好，最近准备用life的kit提取细胞培养上清，请问建议用多少上清呀？

iiibuick

我想请问一下，我也买的SBI的试剂盒，还没开始用，看了说明书有一些不是很清楚的地方，在最后加buffer那步是跟具体的后续操作有关系的，但说明书里主要就是针对RNA extraction 和protein extraction，我如果只是想要提取exosome，后面再标记蛋白，那是不是直接加PBS buffer就可以了？

weaver

iiibuick 发表于 2015-9-9 08:52
我想请问一下，我也买的SBI的试剂盒，还没开始用，看了说明书有一些不是很清楚的地方，在最后加buffer那步 ...

我想问问大家买的什么公司的SBI 试剂盒？哪家的比较好 能不能拍张说明书的图片呢？