外泌体电镜拍出来是这样的，希望大家给点建议

hzangs · 发表于 2015-12-24 16:06:34

zjm337 发表于 2015-12-24 15:37
好的，谢谢！你没有检测CD63吗？

没有去检测这个。 CD63 也是个marker 但是基本上杂两个marker 就可以说明问题了。没有必要杂那么多

子非鱼 · 发表于 2015-12-25 17:18:00

hzangs 发表于 2015-12-23 15:41
他那天直接把自己拍的电镜原图发上来了，为了避免被盗用，我把图删掉了。 ...

有道理，大神想得周到！

子非鱼 · 发表于 2015-12-25 17:20:37

hzangs 发表于 2015-12-24 16:06
没有去检测这个。 CD63 也是个marker 但是基本上杂两个marker 就可以说明问题了。没有必要杂那么多 ...

这样啊，我买了三个，希望能出来至少2个，嘿嘿

revive_0220 · 发表于 2015-12-26 20:20:07

请问一下你你是怎么离心的，我最后用10W g 2h 的沉淀物是淡黄色的，但是电镜的结果比你的好

zjm337 · 发表于 2015-12-29 14:58:03

hzangs 发表于 2015-12-24 16:06
没有去检测这个。 CD63 也是个marker 但是基本上杂两个marker 就可以说明问题了。没有必要杂那么多 ...

好的，谢谢！

zjm337 · 发表于 2015-12-29 15:05:32

revive_0220 发表于 2015-12-26 20:20
请问一下你你是怎么离心的，我最后用10W g 2h 的沉淀物是淡黄色的，但是电镜的结果比你的好 ...

超速离心的方法，100ml 上清，300g 10min，2000g 10min，10000g 30min，100000g 70min 2次，再重悬到50微升PBS中

revive_0220 · 发表于 2015-12-29 22:16:28

zjm337 发表于 2015-12-29 15:05
超速离心的方法，100ml 上清，300g 10min，2000g 10min，10000g 30min，100000g 70min 2次，再重悬到50微 ...

我最近的外泌体很难吹打溶解，吹打下来是一些碎片状的，感觉像有一些黏连物质，不知道你有出现这种状况不？

zjm337 · 发表于 2016-1-9 20:51:35

revive_0220 发表于 2015-12-29 22:16
我最近的外泌体很难吹打溶解，吹打下来是一些碎片状的，感觉像有一些黏连物质，不知道你有出现这种状况不 ...

你提取exosome的培养基用之前离心过吗？多吹打几次应该可以吹打下来吧

zjm337 · 发表于 2016-1-9 21:10:02

hzangs 发表于 2015-12-24 16:06
没有去检测这个。 CD63 也是个marker 但是基本上杂两个marker 就可以说明问题了。没有必要杂那么多 ...

想问问你做WB的时候每个孔加的exosome蛋白浓度是多少？我180ml上清提取出来的蛋白浓度用BCA法检测出来特别低，每提取一次勉强能做一次WB。。总觉得自己方法有问题呢。。

hzangs · 发表于 2016-1-9 22:16:36

zjm337 发表于 2016-1-9 21:10
想问问你做WB的时候每个孔加的exosome蛋白浓度是多少？我180ml上清提取出来的蛋白浓度用BCA法检测出来特 ...

基本每个空上两三微克

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