PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

hzangs

思想滚得远 发表于 2016-5-2 13:09
是SBI的那种去exosome血清么 还是自己超离去除的exosome

自己超离去除的

yayinano

群主，你好，最近使用了你给出来的protocol，我用的是病人抽出来的血清（本人医生），1ml血清，加了1ml的PEG溶液（按照你的方法配的），4度静止放了一晚，第二天离心之后，发现了大量的沉淀，加了1ml的PBS之后，需要用枪吹才能溶解，而后我怕怀疑是大量的蛋白沉淀而已，我把溶解的PBS溶液再次离心了1h 10000g，并没有发现任何的沉淀，由于没有超离的离心机，最后一个步骤无法进行，本人想做外泌体的microRNA，这样的结果能可信吗？还是要做western确定一下？

hzangs

yayinano 发表于 2016-5-4 13:48
群主，你好，最近使用了你给出来的protocol，我用的是病人抽出来的血清（本人医生），1ml血清，加了1ml的PE ...

你还是需要参考一下原文的。  只是我根据之前的一篇文献提供的方法做的。  你要读一下原文  看看他们是怎么做的。  我发这个帖子  主要目的就是验证一下他们方法的可行性，没有再做更多的尝试。

yayinano

谢谢楼主，我在具体看下，血清的，文章里面也没有很具体的描述，头疼中，还有一个技术问题想问下群主，exosomal miRNA的qPCR的内参选择什么合适?跪求指导~

5五吾

请问用0.22um的filter可以吗？

微泡biomarker

请问一下 楼主的WB的最小上样量是多少微克呢？

hzangs

微泡biomarker 发表于 2016-5-5 14:36
请问一下 楼主的WB的最小上样量是多少微克呢？

这个很难说。   几个微克 肯定是够的

5五吾

请教下，楼主，我用0.22um的滤器不会对PEG有影响吧？

微泡biomarker

hzangs 发表于 2016-5-5 17:59
这个很难说。   几个微克 肯定是够的

那问一下楼主，你的WB的上样量 是多少啊

hzangs

微泡biomarker 发表于 2016-5-6 09:12
那问一下楼主，你的WB的上样量 是多少啊

一般最少5个微克