exosome-free FBS的制备策略及使用技巧

lxy_712

hzangs 发表于 2016-7-27 10:05
你只要尽可能保证无菌就可以。 毕竟后面要过0.45um滤器的。你可以用酒精泡一下和血清接触的东西  并用灭 ...

学习了~ 感谢分享~

xuan9630

很好，谢谢~

lczyld

请问楼主，因为借用别的实验室离心机，比较贵，所以尽可能减少时间，
可以先配成含FBS的培养液，然后超离3小时，过滤，就可以得到无外泌体的细胞培养液了？？
还有，你的细胞用这培养液培养多长时间开始提细胞分泌的外泌体

hzangs

lczyld 发表于 2017-5-21 22:27
请问楼主，因为借用别的实验室离心机，比较贵，所以尽可能减少时间，
可以先配成含FBS的培养液，然后超离3 ...

第一个问题，是的。有paper这么做，只是不是主流方法。
第二个问题， 肿瘤细胞  72小时

xuan9630

请问各位站友，收集细胞培养基中的exosome，之后怎么知道exosome的质量呢？有详细的protocol吗？谢谢！

lczyld

xuan9630 发表于 2017-5-23 12:22
请问各位站友，收集细胞培养基中的exosome，之后怎么知道exosome的质量呢？有详细的protocol吗？谢谢！ ...

同问！有看见BCA蛋白定量的、、、、

lczyld

hzangs 发表于 2017-5-22 10:13
第一个问题，是的。有paper这么做，只是不是主流方法。
第二个问题， 肿瘤细胞  72小时 ...

好的，谢谢！还有，请问楼主，如果购买无外泌体的血清，在细胞培养的过程中怎么用？考虑到这种血清很贵，刚开始用普通的培养基培养，就是含10%FBS（有外泌体）的DMEM，到达状态好时，换用含血清（无外泌体）的培养基，培养一两天，然后收集细胞培养液提取外泌体，这样可以么？

xuan9630

lczyld 发表于 2017-5-27 11:55
同问！有看见BCA蛋白定量的、、、、

这位战友，请问你在哪里看到有BCA定量的呢？能不能把出处发给我呢？还有这个BCA蛋白定量的方法的原理是什么呢？我好像只是听别人说过，但是不懂得原理，期待回复，谢谢！

xuan9630

hzangs 发表于 2017-5-22 10:13
第一个问题，是的。有paper这么做，只是不是主流方法。
第二个问题， 肿瘤细胞  72小时 ...

请问楼主，你的exosome定量方法是BCA蛋白定量吗？原理是什么呢？求指导，谢谢！

栾珍珠

hzangs 发表于 2016-7-27 11:08
不同的细胞 提取量不同的。

请问您，海拉细胞分泌的外泌体多吗？