大家关于试剂盒的几点疑问和澄清

seallin

guomengzhou 发表于 2015-12-6 21:18
感谢楼楼提供的方法，我也在做60-70kda的条带。想请问下重溶后再加kit的量是多少了？譬如用50ul的PBS重溶 ...

比例按照提供的体积比即可

guomengzhou

seallin 发表于 2015-12-7 14:02
比例按照提供的体积比即可

好的，谢谢！

哈利郭特

hzangs 发表于 2015-10-28 11:15
对不起刚刚发出的帖子  我感觉有点不妥当，所以对一些数值进行修正。考虑到A549平铺在培养皿中是50um，球 ...

握爪！相见恨晚啊！
你的观点我全部赞同！
如果觉得 粒子数/蛋白量 不方便测的话，最简单的其实可以提个RNA，做个qPCR，然后用同一个RNA的量/蛋白量（比如U6/蛋白量）。
我之前用21ml培养基充分混匀，20ml用超速离心的方法，1ml用试剂盒的方法，提exosomes。1ml试剂盒有大量沉淀，而超速离心根本看不到沉淀，加入trizol，提RNA，qPCR检测U6含量，20ml超离是1ml试剂盒的16倍多，而1毫升试剂盒的沉淀却是一大坨而20ml超离根本看不到，可见有多少杂蛋白。（我用的是life的试剂盒），另外，我用10%的血清（超离18h）不加任何细胞依然可以看到大坨沉淀，可能楼主自己配的PEG更科学吧。
另外特别想请教下hzangs，你们用exosomes处理细胞的时候是用多少ml的培养基的exosomes呀？我看文章上边用量各式各样，用太多了我又觉得不能反映真实情况，太少了没变化，特来请教！

hzangs

哈利郭特 发表于 2016-1-19 12:29
握爪！相见恨晚啊！
你的观点我全部赞同！
如果觉得 粒子数/蛋白量 不方便测的话，最简单的其实可以提个R ...

我之前 做的时候，基本上是用2-3ug protein exosomes / well  24孔板，基本上相当于10^6的细胞的量。o(╯□╰)o    我也不知道我的用量是不是合适。。。

Izon

dw0720 发表于 2016-2-17 23:01
看完后觉得学习好多啊，大家都不更新了吗？我也在做exosomes提取，纠结于怎么评价提取效果，仅仅根据粒径分 ...

第二页11#就有这篇文章的链接：“也比较赞同这篇文章中提出的 “粒子浓度/微克蛋白”表示exosome浓度的方法 "Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma" 【http://www.journalofextracellula ... /article/view/27031】，这种结果更真实准确的反应了exosome在样品中的含量”

有关分离定量的帖子：
http://www.exosome.com.cn/forum. ... ;tid=210&extra=
http://www.exosome.com.cn/forum. ... ;tid=179&extra=

Mxiansheng

haodongdong

william

建议你德国ZetaView看一下你用试剂盒得到外泌体的浓度、颗粒粒径、杂质情况。

husthuagai

真的学到了很多

ucsandiego

hzangs 发表于 2015-10-26 16:50
目前我不建议大家用沉淀试剂盒分离的最主要原因有二：
1、我曾经将life的试剂盒沉淀的所谓的外泌体和超离的 ...

您好，我想请教下你们所说的life的试剂盒就是thermo fisher旗下的invitrogen的试剂盒吗，因为我搜索life technologies就搜索到thermo，而且thermo里的外泌体试剂盒只有invitrogen这个牌子，谢谢解答！

hzangs

ucsandiego 发表于 2017-7-30 17:46
您好，我想请教下你们所说的life的试剂盒就是thermo fisher旗下的invitrogen的试剂盒吗，因为我搜索life  ...

thermo 收购了 invitrogen       life 收购了 thermo