PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

hzangs

whjy2004 发表于 2016-5-19 16:10
请问楼主 ：制备exosome-free FBS 的离心条件？转速和时间

110000g  14-16h~

冷雪儿翱翔

hzangs 发表于 2016-4-27 16:01
这是一个外泌体释放量十分大的细胞。  收集这些外泌体 大概用了7ml 培液

细胞那么给力？赞！

子非鱼

hzangs 发表于 2016-4-26 23:12
第一次 3000g 我还真没有尝试过。
只要有沉淀，基本里面就有外泌体的~

斑竹，我用ExtraPEG，提取培液没有看到沉淀。之前用SBI的kit提取8ml就能见沉淀了，上质谱的结果与ExoCarta能match到89%，所以一开始用ExtraPEG时候，用7ml的培养基，没有见到沉淀；然后又增加到24ml的量，提取，加同等体积的PEG6000，还是没有见到沉淀....我用的4000g离心的（我知道楼主此处用10000g，但是我同时提取血清的外泌体，4000g没问题的），所以想请楼主帮忙分析下可能的问题....多谢！

hzangs

子非鱼 发表于 2016-5-20 11:42
斑竹，我用ExtraPEG，提取培液没有看到沉淀。之前用SBI的kit提取8ml就能见沉淀了，上质谱的结果与ExoCart ...

PEG 是按照我说的那个配置的么？  16%的？  混匀了没？

子非鱼

hzangs 发表于 2016-5-20 20:18
PEG 是按照我说的那个配置的么？  16%的？  混匀了没？

是照您说的，上下颠倒了十几次，应该混匀了，16%的，就是配置的时候忘记用高压过得ddH2O了，配置完后0.22um过滤的

lilingexosome

hzangs 发表于 2016-5-4 14:52
你还是需要参考一下原文的。  只是我根据之前的一篇文献提供的方法做的。  你要读一下原文  看看他们是怎 ...

我想请问一下能不能提供一下文献题目呀，我是新手才进来的，看不到呀，谢谢

hzangs

lilingexosome 发表于 2016-5-21 18:56
我想请问一下能不能提供一下文献题目呀，我是新手才进来的，看不到呀，谢谢 ...

http://www.exosome.com.cn/forum. ... &extra=page%3D1
这里有原文

Mars

hzangs 发表于 2016-4-27 17:46
PEG+超速离心清洗  这个方法还可以。
如果你用一个十几毫升或者几十毫升PBS的体系进行清洗这一步的话，结 ...

这一步是不是文献里最后100000g超高速离心前用PBS洗啊？你用多少啊？文献里说的是1ml

hzangs

Mars 发表于 2016-5-24 12:40
这一步是不是文献里最后100000g超高速离心前用PBS洗啊？你用多少啊？文献里说的是1ml
...

我秀的数据中  是用了1ml
现在我用这个方法的时候 会用30ml

katuysha

楼主，你好，我是新手，想问一下重悬用的PBS是不是也要进行预处理，如果需要，该进行什么样的处理？