exosome-free FBS的制备策略及使用技巧

hzangs

lf19860915 发表于 2017-3-27 14:56
请问，可不可以第一天离心9h，提取上清后第二天再9h，实验室老师说下班后要对大型仪器断电，所以一天最多用 ...

亲， 不行的…    你可以考虑先配置成10%的含血清培液。 然后培液超离，超离完了 过0.45um的滤器。 这样就可以了。   超离时间2-3h 足够了

lf19860915

hzangs 发表于 2017-3-27 20:50
亲， 不行的…    你可以考虑先配置成10%的含血清培液。 然后培液超离，超离完了 过0.45um的滤器。 这样 ...

这种方法有文献支持吗？担心到时发文章时被审稿人要求说明。

hzangs

lf19860915 发表于 2017-3-29 10:59
这种方法有文献支持吗？担心到时发文章时被审稿人要求说明。

你可以自己查一下文献。  这个也是我在文件中见过的，不过使用这种方法的文献不多 ，所以记不清楚了

lf19860915

hzangs 发表于 2017-3-29 15:49
你可以自己查一下文献。  这个也是我在文件中见过的，不过使用这种方法的文献不多 ，所以记不清楚了 ...

没有查询到使用这样方法的文献，多数使用的过夜离心血清。我在外泌体微信群里询问过一些人，说第一次离心血清吸出上清，减少过夜后的扩散和重溶，再进行第二次离心。这样可以相当于过夜离心的效果吧。另外离心好的上清是直接过滤膜还是配成培养基后过滤膜？是选用0.22um还是0.45um的滤膜？谢谢。

huangjingwei24

zhousisi0223 发表于 2017-2-23 15:12
楼主，请问除血清中的外泌体一定要离14-16h吗？因为是借用别的实验室的离心机，他们说机器不能过夜离心，比 ...

Beckman超速离心机离心16-18h  没问题的   内部都是抽真空

弹珠1253

感觉还是对灭菌的问题有顾虑啊，血清应该很容易染菌的吧？
想请问下如果买exosome-free serum一般选哪个牌子呢？大概多少钱呢？

lczyld

hzangs 发表于 2017-2-23 19:56
可以考虑先配置10%FBS的培液，然后培液超离2h，过滤后用于细胞培养。 有文章报道过这个方法。文章的IF在 ...

楼主，啥意思，这样超离2小时就可以去除外泌体了？

鱼儿

谢谢楼主

hzangs

lczyld 发表于 2017-5-13 23:05
楼主，啥意思，这样超离2小时就可以去除外泌体了？

是的

lxy_712

hzangs 发表于 2016-7-27 10:05
你只要尽可能保证无菌就可以。 毕竟后面要过0.45um滤器的。你可以用酒精泡一下和血清接触的东西  并用灭 ...

学习了~ 感谢分享~