exosome-free FBS的制备策略及使用技巧

hzangs

zhousisi0223 发表于 2017-2-23 15:12
楼主，请问除血清中的外泌体一定要离14-16h吗？因为是借用别的实验室的离心机，他们说机器不能过夜离心，比 ...

可以考虑先配置10%FBS的培液，然后培液超离2h，过滤后用于细胞培养。 有文章报道过这个方法。文章的IF在三五分的样子。

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-8 11:30
请问您铺的培养皿是25还是75？

15cm直径的 培养皿  好像差不多相当于T75

hzangs

lf19860915 发表于 2017-3-27 14:56
请问，可不可以第一天离心9h，提取上清后第二天再9h，实验室老师说下班后要对大型仪器断电，所以一天最多用 ...

亲， 不行的…    你可以考虑先配置成10%的含血清培液。 然后培液超离，超离完了 过0.45um的滤器。 这样就可以了。   超离时间2-3h 足够了

hzangs

lf19860915 发表于 2017-3-29 10:59
这种方法有文献支持吗？担心到时发文章时被审稿人要求说明。

你可以自己查一下文献。  这个也是我在文件中见过的，不过使用这种方法的文献不多 ，所以记不清楚了

hzangs

lczyld 发表于 2017-5-13 23:05
楼主，啥意思，这样超离2小时就可以去除外泌体了？

是的

hzangs

lczyld 发表于 2017-5-21 22:27
请问楼主，因为借用别的实验室离心机，比较贵，所以尽可能减少时间，
可以先配成含FBS的培养液，然后超离3 ...

第一个问题，是的。有paper这么做，只是不是主流方法。
第二个问题， 肿瘤细胞  72小时

hzangs

栾珍珠 发表于 2017-6-20 16:52
请问您，海拉细胞分泌的外泌体多吗？

没有试过 hela    但作为一个肿瘤细胞  它的释放量不会太低

hzangs

小朋友玩 发表于 2017-7-25 08:41
黄老师您好，我是将细胞饥饿处理48h后收取上清分离外泌体，这个过程没有FBS，这样是不是就不需要exosome-fr ...

是的    你这样处理 就不许要无外泌体血清了。

hzangs

牛牛 发表于 2017-8-16 17:26
大神 你用的50m离心管是什么样的管子啊？普通的50ml离心管这么弄会不会爆？ ...

我用的是日立 P28S 转头， 一管大约装38-40ml

hzangs

请自行搜索阅读，谢谢您的理解。
（PMID：24735924、25417103、25985394、26524530、26106858）