血清外泌体中WB有跑出TSG101、Alix的没？

zqlhiiaxyz · 发表于 2016-7-28 17:17:55

各位大神！用SBI的exoquick提血清外泌体，大家有跑出Tsg101和Alix的吗？跑了好几次了，曝光啥都没？求指导

hereissyk · 发表于 2016-8-1 17:11:12

别浪费钱用SBI了。

sldingxiang · 发表于 2016-7-29 09:03:51

我分别用超离和SBI试剂盒提的外泌体，跑的alix，超离的能跑出条带，试剂盒跑的条带是很粗的一坨。抗体是CST的。

zqlhiiaxyz · 发表于 2016-7-29 18:50:50

谢谢您的回复！我是250ul血清用SBI试剂盒提的，沉淀直接用150ul 2XRIPA裂解液涡旋1min，室温放置了20min裂的，其后加了5x loading buffer 38ul，100度7min煮蛋白。做WB是加样10ul，做ALix曝光压片压了一夜，啥也没有。也是CST抗体，用的是Alix (3A9) Mouse mAb #2171，不知您用的哪种？我这些步骤中有没不合适的，麻烦您指导一下