PEG聚沉，先8%后5%的原理是什么？

子非鱼

RT：PEG6000两次聚沉，先后浓度不一样的原理是啥？因为我3次提血清exo，8%聚沉后可见沉淀，到5%的时候就沉不下来了（偶尔也有那么一次沉下来过），后来改成两次8%的聚沉就都能沉下来，但是我不知这样做对不，希望大家解惑哈~!

子非鱼

hzangs 发表于 2016-8-5 22:53
浓度越低。 杂蛋白越少

谢谢！深刻体会到了沉淀法提取exo做蛋白的艰难了，感觉so hard，我要停下来了，等有超离了再说吧

子非鱼

zqlhiiaxyz 发表于 2016-8-8 10:05
楼主，你8%沉淀后，用多少PBS稀释的？后来的5%是过夜沉的还是几个小时？

1ml的血清25mlPBS稀释，25ml的16%PEG进行1次聚沉；然后沉淀25mlPBS稀释，等体积16%PEG进行2次聚沉，过夜沉，我试过2h（忘记在哪看的2h这个点了）完全不行。

子非鱼

hzangs 发表于 2016-8-5 22:53
浓度越低。 杂蛋白越少

话说回来，8%的浓度是让exo沉的，之后PBS一溶解相当于又回到原点了，5%再一次聚沉，浓度降低，杂蛋白少了的同时，是不是也损失相当一部分exo了（不知描述清楚没）？如果是，那二次沉淀就属于“伤敌一千，自损八百”了，自杀式的提取啊......