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楼主: LQLQLQ

PKH67染色的疑惑

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发表于 2016-8-10 14:45:23 | 显示全部楼层 |阅读模式
各位大神,我按说明书用Pkh67染的exosome,然后等体积1%BSA终止,然后100000g,70mins离心得到沉淀,但是这个沉淀既有exosome也有剩余的染料,我用PBS重悬沉淀再用它处理细胞,但是在共聚焦显微镜下观察,发现沉淀下来的剩余染料把细胞也都染上颜色了,导致exosome和细胞都成绿色,鉴别不开了 ,各位遇到过这种情况吗?怎么解决的,多谢大家了!!
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 楼主| 发表于 2016-8-11 09:33:23 | 显示全部楼层
Johnny 发表于 2016-8-10 16:50
这个沉淀既有exosome也有剩余的染料是怎么区分的?

没法区分,只是一些沉淀贴在管底,沉淀量明显比我之前提的exosome沉淀多,然后再用这些沉淀处理细胞,细胞膜都被染上色了
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发表于 2016-8-12 09:54:08 | 显示全部楼层
我是用其他的染料但是也遇到了和你一样的问题!我用o.22um的滤头过滤之后就没事了!你可以把你染好的外泌体滴到玻片上拿到荧光显微镜下观察,一般多于的染料都是大颗粒的!
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 楼主| 发表于 2016-8-13 13:30:22 | 显示全部楼层
Johnny 发表于 2016-8-11 10:22
染料怎么可能有那么多。。。肉眼可见的量?

对,黄色的沉淀贴在管底,不多,但是肉眼可见
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 楼主| 发表于 2016-8-13 13:31:42 | 显示全部楼层
wooway 发表于 2016-8-12 09:54
我是用其他的染料但是也遇到了和你一样的问题!我用o.22um的滤头过滤之后就没事了!你可以把你染好的外泌体 ...

恩,好的,太感谢你了!!
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发表于 2017-5-5 20:58:55 | 显示全部楼层
wooway 发表于 2016-8-12 09:54
我是用其他的染料但是也遇到了和你一样的问题!我用o.22um的滤头过滤之后就没事了!你可以把你染好的外泌体 ...

请教一下,您用0.22um的滤头滤的是荧光染料吗
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发表于 2018-1-22 20:53:30 | 显示全部楼层
wooway 发表于 2016-8-12 09:54
我是用其他的染料但是也遇到了和你一样的问题!我用o.22um的滤头过滤之后就没事了!你可以把你染好的外泌体 ...

请问 重新超离之后可以看到沉淀吗
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发表于 2020-8-30 22:47:47 | 显示全部楼层
版主最后怎么处理的? 我现在也遇到同样的问题啊!!!求救!!!
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发表于 2021-2-25 16:53:07 | 显示全部楼层
同样求助,染完pkh26,再次上10万g离心,竟然能看到沉淀,想不通,多余染料也被离心下来了吗?
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