新鲜出炉的电镜求鉴定

grapetian · 发表于 2016-9-20 17:29:10

请大神们帮我鉴定下电镜图，为什么我同一个样品做出来的囊泡大小都有，30nm-150nm不等,还有几个200nm左右的。形态也各异，什么样的都有。样品是细胞上清液超离得到的。另外背景也不干净，电镜老师说是蛋白污染。还有丝状的不知道是什么？

grapetian · 发表于 2016-9-21 16:06:04

Johnny 发表于 2016-9-20 17:47
那些小的是外泌体，大的是shedding vesicle了。背景不干净确实是蛋白的污染。

总体来说，你的电镜效果还是 ...

那要怎么样可以除去蛋白污染，让背景干净点？pbs多洗几遍吗？

jzhou65 · 发表于 2016-9-24 00:11:53

请问您具体是怎么提取的啊？谢谢！

Odie · 发表于 2016-9-24 12:46:10

估计你用的离心法测的吧。会有很多细胞碎片等杂质（提取试剂盒本人测试效果不错，大小比较均一），制样的时候也要保证干净（包括上样片），最后一个是适宜的浓度。

grapetian · 发表于 2016-9-26 12:24:08

jzhou65 发表于 2016-9-24 00:11
请问您具体是怎么提取的啊？谢谢！

超速离心法提取的收集细胞培养上清，300g 10min 2000g 20min 10000g 30min 100000g 1h, pbs洗一遍 100000g 1h

grapetian · 发表于 2016-9-26 12:37:14

Odie 发表于 2016-9-24 12:46
估计你用的离心法测的吧。会有很多细胞碎片等杂质（提取试剂盒本人测试效果不错，大小比较均一），制样的时 ...

对啊我用的超离，你用什么试剂盒提取的？

中义 · 发表于 2016-9-29 12:49:08

应该在去上清时彻底一点，留上清时保守一点，这样有助于减少蛋白污染。

小七果果8 · 发表于 2016-10-1 10:46:35

请问如果暂时没有100000g的离心机可以用，后面几步用8000g的是不是完全没有意义，根本不可能提出外泌体，求助~

五仁 · 发表于 2016-10-9 23:33:35

楼主超速离心的时候，最后用pbs重悬，我看文献上说用20微升到50微升经行，但是原本离心管壁上就有液体，怎么处理？50微升的PBS加入到那么大的超速离心管中，就和大海捞针一样，怎么重悬？感谢楼主能够排疑

grapetian · 发表于 2016-10-10 13:14:12

五仁发表于 2016-10-9 23:33
楼主超速离心的时候，最后用pbs重悬，我看文献上说用20微升到50微升经行，但是原本离心管壁上就有液体，怎 ...

不是啊，你离心的话肯定是pbs要加满超离管的，最后一步是加20-30ul重悬后做鉴定

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