生无可恋...

今日事今日毕

woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:07
都用过，比较推荐超离，杂质比试剂盒的要少很多，而且很适合大批量提取 ...

大神，你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗？具体转速 时间能透露一下吗？不胜感激！

woshiyywlly

今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:08
我超离之后还是有沉淀的，但是电镜下看不到，染色也染不出来....已疯..... ...

同情你，超离完有再洗一遍吗？

今日事今日毕

woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:16
同情你，超离完有再洗一遍吗？

再洗一遍？具体指的是哪一步，用pbs把沉淀洗一下之后再离心吗？

woshiyywlly

今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:14
大神，你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗？具体转速 时间能透露一下吗？不胜感激！{ ...

前面是一样的，后面是110000g 70min

woshiyywlly

今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:14
大神，你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗？具体转速 时间能透露一下吗？不胜感激！{ ...

在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下

今日事今日毕

woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:20
在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下

没过滤过...我在文献上看到这一步的目的是为了除菌，有的文献上没有这一步，就没过滤过，请问这一步的作用还有什么呢？

woshiyywlly

今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:23
没过滤过...我在文献上看到这一步的目的是为了除菌，有的文献上没有这一步，就没过滤过，请问这一 ...

就是第一次110000g 70min后用PBS重悬。过滤也是为了去除杂质，可以尽量去除直径大的囊泡和其他一些物质

今日事今日毕

woshiyywlly 发表于 2016-10-9 11:16
就是第一次110000g 70min后用PBS重悬。过滤也是为了去除杂质，可以尽量去除直径大的囊泡和其他一些物质 ...

好的，明白了，我试试，谢谢大神

五仁

woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:20
在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下

最后用PBS重悬也是一个问题。文献上说用20微升到50微升的PBS重悬，但这么少的液体加入进去，实在是大海捞针，怎么重悬，最后吸出的液体甚至超过了100微升，因为原本管壁上就有剩余的液体。

五仁

今日事今日毕 发表于 2016-10-10 09:02
好的，明白了，我试试，谢谢大神

楼主，使用超速离心，最后的pellet能看能到吗？我的完全是看不到的