SBI试剂盒提取培养液及血清外泌体protocol

yuantingdong

请教一下，我整理了一下SBI试剂盒提取培养液和血清外泌体的步骤，麻烦用SBI提取外泌体的亲们帮我审阅审阅呗，十分感谢！

katuysha

芮苏遥 发表于 2017-4-18 12:42
请问下，其他来源外泌体的标志蛋白 WB验证 有出条带嘛？

kit沉淀完后，加一步洗脱，用大体积的PBS洗去杂蛋白，再离心收集，这样就可以用WB做出结果。只是这样会损失大量的外泌体。

芮苏遥

上个月用了SBI试剂盒提了细胞培液的外泌体，提了三种细胞，有两种细胞同上操作没有看到离心沉淀的外泌体。不知道楼主有没有碰到过这种情况。
收取培液的方法：
细胞密度达约80%后，换无血清的纯培培养48h以上，过程中细胞状态良好。
共收取了35ml的培液，去除细胞碎片后，按照5:1加入SBI exoquick TC，混匀静置过夜离心，未见沉淀

我是小白

请问提取出来的杂蛋白那么多，如何验证蛋白是位于外泌体上或者内呢？

yuantingdong

芮苏遥 发表于 2016-10-19 10:44
上个月用了SBI试剂盒提了细胞培液的外泌体，提了三种细胞，有两种细胞同上操作没有看到离心沉淀的外泌体。 ...

我还没做，不过这个应该跟细胞有关吧，另外之前论坛里也有人说，看不见不意味着没有，接着做试试？做了再和你交流哈

芮苏遥

yuantingdong 发表于 2016-10-21 11:20
我还没做，不过这个应该跟细胞有关吧，另外之前论坛里也有人说，看不见不意味着没有，接着做试试？做了再 ...

好的。我今天用了life的试剂盒提了下细胞培液上清。1ml+0.5ml提取试剂，离心有看到沉淀，还没做过鉴定。不过这是另一种细胞，1毫升的培液上清就能看到沉淀，相比之前35毫升还看不到沉淀的提取让人欣慰多了

蛮夷不蛮

楼主 你有用SBI公司的CD9检测试剂盒吗？

cluo83

血清的为什么不多加一步12000g离心，然后0.22um过滤一下？

yuantingdong

cluo83 发表于 2016-10-25 14:14
血清的为什么不多加一步12000g离心，然后0.22um过滤一下？

恩，我觉得应该可以，本来超离就有这一步嘛，我后续也加了过滤。你做了没？效果如何？谢谢

yuantingdong

芮苏遥 发表于 2016-10-23 23:40
好的。我今天用了life的试剂盒提了下细胞培液上清。1ml+0.5ml提取试剂，离心有看到沉淀，还没做过鉴定。 ...

我用培养液15ml，提出来沉淀挺多的，不过还没鉴定，怎么看到底纯不纯呢？

dlwlrma

芮苏遥 发表于 2016-10-23 23:40
好的。我今天用了life的试剂盒提了下细胞培液上清。1ml+0.5ml提取试剂，离心有看到沉淀，还没做过鉴定。 ...

请问你用的什么细胞呀？1ml就能看到沉淀呀?