外泌体BCA测出蛋白浓度太低，请教大家

exosun · 发表于 2016-11-15 13:05:59

我用2016年的protocol超离的外泌体，看不到沉淀，重悬在200ulPBS中-80保存，4天后不加裂解液，直接BCA测定蛋白浓度，想跑标志蛋白的western，蛋白浓度很低，只有0.396ug/ul，请问大家可能是哪里出了问题？

exosun · 发表于 2016-11-16 00:16:24

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul，浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1 ...

谢谢，明天就准备干起来了！

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-11-15 23:21:40

0.4ug/ul，浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1）。

张外泌体 · 发表于 2016-12-22 08:43:56

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul，浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1 ...

你好，我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体，结果怎么都做不出来，想问下是抗体的原因吗？电镜做了能看到外泌体的结构

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-12-23 01:56:21

张外泌体发表于 2016-12-22 08:43
你好，我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体，结果怎么都做不出来，想问下是抗体的原因吗？ ...

CD63：Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1： BD Bioscience
这些是我用的抗体，效果还不错。
你试试actin或GAPDH抗体，外泌体中可以检测到这两个蛋白。或者转膜后用立春红染色看看蛋白含量。

张外泌体 · 发表于 2016-12-23 09:01:20

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-23 01:56
CD63：Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1： BD Bioscience
这些是我用的抗体，效果还不错。

我试一下，太谢谢你了

今日事今日毕 · 发表于 2017-1-3 11:12:09

楼主，新手问一下，你BCA测浓度，是用的试剂盒吗

exosun · 发表于 2017-2-12 19:08:29

今日事今日毕发表于 2017-1-3 11:12
楼主，新手问一下，你BCA测浓度，是用的试剂盒吗

都是实验室可以直接领的试剂，没有试剂盒。

JKF · 发表于 2018-1-23 21:23:48

我也没有看到沉淀，正在测浓度

JKF · 发表于 2018-1-23 21:25:16

张外泌体发表于 2016-12-22 08:43
你好，我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体，结果怎么都做不出来，想问下是抗体的原因吗？ ...

测BCA 需要先裂解吗

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

站长推荐 /1