跪求外泌体RNA的提取方法？

xiaodoudou · 发表于 2016-11-23 10:11:14

各位大神，你们都是怎么提取外泌体中的RNA的呢？用nanodrop能测出浓度吗？

woshiyywlly · 发表于 2016-11-23 18:22:27

直接加trizol提

xiaodoudou · 发表于 2016-11-23 19:00:23

woshiyywlly 发表于 2016-11-23 18:22
直接加trizol提

那你用酒精沉淀了吗？我感觉到最后RNA都给整没了？

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-11-24 04:44:55

我们实验室提microRNA，先用Trizol裂解，然后再用Ambion试剂盒提取。含量确实不高，不过real time－PCR够用了。
另外：你用多少exosomes？我们用8－10个T150 flasks的上清超离。

xiaodoudou · 发表于 2016-11-24 14:42:56

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 04:44
我们实验室提microRNA，先用Trizol裂解，然后再用Ambion试剂盒提取。含量确实不高，不过real time－PCR够用 ...

我差不多用的是70ML细胞上清，只不过超离沉淀时我先用PBS 重悬起来了，没有直接TRIZOL裂解。这加trizol比例怎么定好呢？

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-11-24 22:48:42

xiaodoudou 发表于 2016-11-24 14:42
我差不多用的是70ML细胞上清，只不过超离沉淀时我先用PBS 重悬起来了，没有直接TRIZOL裂解。这加trizol比 ...

我们实验室用的是35ml离心管，弃去上清后，加200ul Trizo就l可以铺满管底了。

wxz · 发表于 2016-11-25 13:27:37

沉淀出Exosomes后用Trizol法提RNA时，建议使用糖原，可以促进核酸溶解，提高RNA得率

xiaodoudou · 发表于 2016-11-28 11:15:45

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 22:48
我们实验室用的是35ml离心管，弃去上清后，加200ul Trizo就l可以铺满管底了。 ...

后期是用酒精洗沉淀，DEPC水溶解测浓度吗？

xiaodoudou · 发表于 2016-11-28 11:17:48

wxz 发表于 2016-11-25 13:27
沉淀出Exosomes后用Trizol法提RNA时，建议使用糖原，可以促进核酸溶解，提高RNA得率 ...

您的意思是往DEPC水里加糖原吗？是什么原理啊？

wxz · 发表于 2016-11-28 17:01:43

是用异丙醇沉淀RNA时加入糖原，糖原可以促进核酸的溶解

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