外泌体蛋白浓度问题

ronaldchen · 发表于 2018-1-12 14:45:27

baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-9 23:08
大鼠原代胶质细胞来源的外泌体，100ml无血清培养基，24小时后超离收集外泌体。50微升RIPA重悬，BCA定蛋白 ...

请问你做的marker是？ CD63好做么？

ronaldchen · 发表于 2018-1-13 23:12:13

baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-13 00:03
CD63, flotilin, tsg101
CD63用的是Santa Cruz的抗体，还可以。Smear大小在50-70Kda之间 ...

我没做出来，不知道是不是吸的时候把外泌体弄丢了...

ronaldchen · 发表于 2018-1-15 14:10:27

CD63，其他的marker还没有到货，CD63用的和你一样的抗体。
我在想可能是吸的时候，很难避免吸掉了。是不是倒好些？我用的水平转头。
或者说用真空泵吸

ronaldchen · 发表于 2018-1-15 19:38:24

baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-15 01:57
弃上清这一步确实要小心，慢慢操作。
你是所有marker都没做出来，还是只有CD63没做出来？ ...

刚做出来了CD63, 吸的时候留了很多上清，才做出来的。
这样外泌确保在，不过上清留得太大，杂蛋白也太多。
不知道您是怎么弃上清的呢？是吸还是倒呢？还是会留一点？

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