为什么我流式染外泌体表面标记总然不出来

免疫小子

用的是4um的乳胶珠invitregen的，直接和外泌体孵育过夜，甘氨酸终止，然后染表面荧光抗体，同时同型染外泌体结合的微珠作为对照，结果显示与同型相比，外泌体表面标记并没有发现阳性，WB做出来证明外泌体含有该抗原。做了好几次都没有做出来，是不是我用的外泌体量不够，可是这已经是WB的5倍量了，请问各位老师通道，这个染外泌体有什么需要注意的地方，能不能提供一份切实可行的染色Protocol？谢谢了