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有没有 简单好用又便宜的miRNA qPCR检测方法?

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发表于 2017-3-15 13:50:46 | 显示全部楼层 |阅读模式
本帖最后由 hzangs 于 2017-3-20 19:35 编辑

没有?

这个可以有!!!而且hzangs对该方法进行了测试!引物的评判一般考虑特异性和扩增效率,特异性可以通过qPCR溶解曲线的峰型得出,而扩增效率需要比较不同方法、不同引物对同一基因的扩增效果才可得出。考虑到扩增效率评定比较繁琐,所以hzangs在测试时只考察了引物的特异性问题。hzangs利用该软件设计引物10对,以抽提的细胞total RNA作为起始RNA,利用该策略进行qPCR检测。其中7对在所有样品中溶解曲线均为单峰,2对在个别样品中出现杂峰,1对在所有样品中出现杂峰。另:出现杂峰的3对引物,其中2对引物的CT值在30以上,可以认为是极低丰度miRNA。
补充两点:1、 生成的引物在 运行算法  后 产生的新文档里!!! 2、加尾后 RNA不需要纯化,直接吸取一定数量加尾反应液进行逆转录即可。
软件在此!  方法请见微信推文!  链接:https://mp.weixin.qq.com/s/JoJczBvNTG76GpXbygca8g
使用该方法发文章,记得引用原发明人的论文。
附件已隐藏,回复该贴可查看附件  
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释疑:
推出该方法后有朋友在微信后台留言认为这就是常规的加尾法检测miRNA,用软件设计加尾法miRNA引物本身就是个错误。  hzangs首先在这里感谢这位朋友的批评和意见。不过对于技术的探讨是仁者见仁智者见智的事情。
hzangs在此解释一下该方法与传统加尾法检测miRNA的技术差别:
传统的加尾法上游引物是miRNA序列本身,下游则是通用引物。通用引物的问题在于没有特异性,传统加尾法miRNA qPCR的引物特异性完全依靠上游引物,这就导致了传统的方法特异性低,qPCR过程容易出现非特异性扩增等问题。hzangs分享的方法下游引物的3‘端引入了靶miR的几个碱基,增强了特异性。同时基于引物设计软件自带的算法选择了下游引物3'端与靶miRNA匹配的碱基数。这也是为什么该方法需要引物设计软件的原因。如果大家还有什么问题,可以在本帖留言,与hzangs就该方法进行讨论。





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发表于 2019-5-5 16:42:44 | 显示全部楼层
您好,请问能分享一下您买的polyA加尾酶的货号吗
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发表于 2017-3-15 15:07:50 | 显示全部楼层
厉害了.刚刚还在考虑怎么做miRNA
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发表于 2017-3-15 15:36:54 | 显示全部楼层
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谢谢楼主分享
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发表于 2017-3-15 15:54:43 | 显示全部楼层
厉害,谢谢楼主分享,刚好做引物
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发表于 2017-3-15 15:55:16 | 显示全部楼层
方便快捷高效
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发表于 2017-3-15 15:55:48 | 显示全部楼层
厉害了楼主,解决了现在的当务之急
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发表于 2017-3-15 16:09:22 | 显示全部楼层
用了之后怎么闪退啊。。。。
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 楼主| 发表于 2017-3-15 16:46:25 | 显示全部楼层
红桃k 发表于 2017-3-15 16:09
用了之后怎么闪退啊。。。。

看来没有好好读推文哦,好好研究一下推文    引物在运行算法之后产生的新文档里。
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发表于 2017-3-15 16:49:28 | 显示全部楼层
谢谢楼主分享!!!
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