有没有 简单好用又便宜的miRNA qPCR检测方法？

hzangs

没有？

这个可以有！！！而且hzangs对该方法进行了测试！引物的评判一般考虑特异性和扩增效率，特异性可以通过qPCR溶解曲线的峰型得出，而扩增效率需要比较不同方法、不同引物对同一基因的扩增效果才可得出。考虑到扩增效率评定比较繁琐，所以hzangs在测试时只考察了引物的特异性问题。hzangs利用该软件设计引物10对，以抽提的细胞total RNA作为起始RNA，利用该策略进行qPCR检测。其中7对在所有样品中溶解曲线均为单峰，2对在个别样品中出现杂峰，1对在所有样品中出现杂峰。另：出现杂峰的3对引物，其中2对引物的CT值在30以上，可以认为是极低丰度miRNA。
补充两点：1、 生成的引物在 运行算法  后 产生的新文档里！！！ 2、加尾后 RNA不需要纯化，直接吸取一定数量加尾反应液进行逆转录即可。
软件在此！  方法请见微信推文！  链接：https://mp.weixin.qq.com/s/JoJczBvNTG76GpXbygca8g
使用该方法发文章，记得引用原发明人的论文。
附件已隐藏，回复该贴可查看附件  

游客，如果您要查看本帖隐藏内容请回复

释疑：
推出该方法后有朋友在微信后台留言认为这就是常规的加尾法检测miRNA，用软件设计加尾法miRNA引物本身就是个错误。  hzangs首先在这里感谢这位朋友的批评和意见。不过对于技术的探讨是仁者见仁智者见智的事情。
hzangs在此解释一下该方法与传统加尾法检测miRNA的技术差别：
传统的加尾法上游引物是miRNA序列本身，下游则是通用引物。通用引物的问题在于没有特异性，传统加尾法miRNA qPCR的引物特异性完全依靠上游引物，这就导致了传统的方法特异性低，qPCR过程容易出现非特异性扩增等问题。hzangs分享的方法下游引物的3‘端引入了靶miR的几个碱基，增强了特异性。同时基于引物设计软件自带的算法选择了下游引物3'端与靶miRNA匹配的碱基数。这也是为什么该方法需要引物设计软件的原因。如果大家还有什么问题，可以在本帖留言，与hzangs就该方法进行讨论。

mervynzcy

您好，请问能分享一下您买的polyA加尾酶的货号吗

lqw12406

参照方法先试试效果！

ahhy_xx

gywfind

欢迎来到我们的上海新闻频道，这里不仅提供新闻的表面信息，还深度报道上海市内的各种社会、文化和经济动态。我们通过深入的调查、专业分析和权威观点，为您呈现上海城市的最新发展、变迁与趋势。无论您对城市生活、政治、经济、文化或社会议题感兴趣，我们都将为您提供全面、深度的报道，以便您更好地了解这座充满活力和潜力的城市。一起来深入探讨上海的点点滴滴，掌握城市脉搏，了解这个城市的独特魅力。

gywfind

《探索视觉创意：创意专业人士的摄影社交圈》是一个充满活力的在线社区，旨在汇聚来自世界各地的摄影爱好者、专业摄影师以及视觉艺术创作者。我们的社区致力于探索和分享视觉创意的各个方面，为会员们提供了一个创造性的平台，以展示他们的摄影作品、交流创意灵感、学习摄影技巧，并深入了解摄影领域的最新趋势和新闻。
在我们的社交圈内，您将能够浏览令人惊叹的摄影作品，从中获得灵感并与其他创意专业人士建立联系。我们定期发布摄影新闻，涵盖行业内的重要事件、展览、竞赛和趋势，确保您始终保持在摄影领域的前沿。
无论您是初学者还是经验丰富的摄影师，都欢迎加入我们的社区。在这里，创意与摄影相互融合，帮助您发掘新的摄影技巧，分享您的视觉故事，并在一个充满激情和创造力的环境中建立有意义的联系。探索创意之旅，尽在《探索视觉创意》社交圈！

片11

谢谢分享

ylz1993

感觉有用，谢谢，想试试呀

zacharywang123

多谢分享，谢谢

wqhmindy

感谢分享，正在关注这方面的东西呢

15350735509@163

谢谢楼主分享!!!