exosome的小鼠实验 我又要重新开始了

yy8651

hzangs 发表于 2015-4-26 14:08
我没有检测过。  这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室 访问了半年的副研究员介绍给我的 ...

那是拿普通的血清直接离心11000g？不需要稀释吗？

hzangs

yy8651 发表于 2015-4-24 16:25
你好，有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome，请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗 ...

我没有检测过。  这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室 访问了半年的副研究员介绍给我的。他说那边一直使用这个方法。所以我就没多考虑 直接拿来用了……

yy8651

hzangs 发表于 2015-4-16 12:23
我用exosomes-free的FBS配制培液，然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000 ...

你好，有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome，请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗？

effiezhang66

求问是用盒子提的外体还是超离呢？

hzangs

yy8651 发表于 2015-4-15 19:01
你是用无血清培养还是去exosome培养？怎么分离exosome？是离心吗？

我用exosomes-free的FBS配制培液，然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000g超速离心8小时取上清。

hzangs

向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA ...

0.2 ug/ul 也不算低了，100ul 也有20ug了。

我打老鼠  是从尾静脉带进去，每只在2-3ug

yy8651

hzangs 发表于 2015-4-15 16:17
亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞 ...

你是用无血清培养还是去exosome培养？怎么分离exosome？是离心吗？

向荣y

hzangs 发表于 2015-4-15 16:17
亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞 ...

哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA测的浓度才0.2微克每微升，作用到细胞上完全看不出变化。所以想问一下你的外体浓度是多少呢？要做动物实验，外题的量是不是要更大一些？

hzangs

向荣y 发表于 2015-4-15 14:33
亲 你用于动物实验的外泌体浓度多高啊？一周二百多微升的外泌体需要二百多毫升的上清吧？得养了六七十瓶细 ...

亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞exosomes的，基本上需要15cm dish 20盘-25盘

hzangs

nene 发表于 2015-4-3 10:02
很弱弱地问，啥是 exosome training 小鼠微环境？
是我断错了句了？

exosomes training mice micro-environment

意思就是使用外源的exosomes打回小鼠体内，来影响改造小鼠一些特定器官的微环境