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楼主: hzangs

exosome的小鼠实验 我又要重新开始了

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发表于 2015-4-15 19:01:09 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2015-4-15 16:17

我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞 ...

你是用无血清培养还是去exosome培养?怎么分离exosome?是离心吗?
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 楼主| 发表于 2015-4-16 12:20:45 | 显示全部楼层
向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦,我用的25cm2的培养瓶养的干细胞,但是外体浓度好低啊,160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes,BCA ...

0.2 ug/ul 也不算低了,100ul 也有20ug了。

我打老鼠  是从尾静脉带进去,每只在2-3ug
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 楼主| 发表于 2015-4-16 12:23:23 | 显示全部楼层
yy8651 发表于 2015-4-15 19:01
你是用无血清培养还是去exosome培养?怎么分离exosome?是离心吗?

我用exosomes-free的FBS配制培液,然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000g超速离心8小时取上清。
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发表于 2015-4-24 10:33:12 | 显示全部楼层
求问是用盒子提的外体还是超离呢?
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发表于 2015-4-24 16:25:51 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2015-4-16 12:23
我用exosomes-free的FBS配制培液,然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000 ...

你好,有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome,请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗?
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 楼主| 发表于 2015-4-26 14:08:53 | 显示全部楼层
yy8651 发表于 2015-4-24 16:25
你好,有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome,请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗 ...

我没有检测过。  这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室 访问了半年的副研究员介绍给我的。他说那边一直使用这个方法。所以我就没多考虑 直接拿来用了……
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发表于 2015-4-26 15:37:04 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2015-4-26 14:08
我没有检测过。  这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室 访问了半年的副研究员介绍给我的 ...

那是拿普通的血清直接离心11000g?不需要稀释吗?
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 楼主| 发表于 2015-4-27 21:11:22 | 显示全部楼层
yy8651 发表于 2015-4-26 15:37
那是拿普通的血清直接离心11000g?不需要稀释吗?

我确实没有稀释。
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发表于 2015-5-27 20:49:13 | 显示全部楼层
想问一下你打的频率,剂量,还有周期。。。。。我准备打大鼠。。。。
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 楼主| 发表于 2015-5-28 11:15:06 | 显示全部楼层
wooway 发表于 2015-5-27 20:49
想问一下你打的频率,剂量,还有周期。。。。。我准备打大鼠。。。。

每周两次,一次2-3ug ,连续打1个月  打的小鼠
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