exosome的小鼠实验 我又要重新开始了

hzangs

经过了接近3个月的休整和方案调整。我又要开始跳坑了。我要开始做exosome training 小鼠微环境的动物实验了。上次一口气做了近3个月，每个周分离二百多微克的exosome，这次又要来了。过来立个帖子，激励一下自己!!!





PS:书于2015-7-12    小鼠实验已经结束，通过膝盖处穿刺分别注射高、低转移细胞株分泌的exosome， training小鼠骨微环境，每周2次，一次3ug/只，持续一个月。之后心脏注射中等转移能力肿瘤细胞株构建骨转移模型。追踪转移情况，持续6周。
结果，注射高转移细胞株exosome的一组小鼠转移能力确实比另一组要高一些。但是BLI检测转移信号强度差异在2倍左右，差异倍数过小。因此动物实验提前结束，没有进行后续的继续研究。准备从体外实验入手开始研究exosome是否对转移具有影响。
建议大家以后可以考虑先从体外实验入手，再逐渐上动物实验，可能会更靠谱些。

hzangs

大琳宝儿 发表于 2015-4-2 08:05
做小鼠？是在体exosome实验吗？那你们有没有从组织中试图提取exosome啊？还是提取exosome回注体内的方法？ ...

我是将细胞系分泌的exosome 重新输入到小鼠的循环系统中。

hzangs

nene 发表于 2015-4-3 10:02
很弱弱地问，啥是 exosome training 小鼠微环境？
是我断错了句了？

exosomes training mice micro-environment

意思就是使用外源的exosomes打回小鼠体内，来影响改造小鼠一些特定器官的微环境

hzangs

向荣y 发表于 2015-4-15 14:33
亲 你用于动物实验的外泌体浓度多高啊？一周二百多微升的外泌体需要二百多毫升的上清吧？得养了六七十瓶细 ...

亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞exosomes的，基本上需要15cm dish 20盘-25盘

hzangs

向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA ...

0.2 ug/ul 也不算低了，100ul 也有20ug了。

我打老鼠  是从尾静脉带进去，每只在2-3ug

hzangs

yy8651 发表于 2015-4-15 19:01
你是用无血清培养还是去exosome培养？怎么分离exosome？是离心吗？

我用exosomes-free的FBS配制培液，然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000g超速离心8小时取上清。

hzangs

yy8651 发表于 2015-4-24 16:25
你好，有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome，请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗 ...

我没有检测过。  这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室 访问了半年的副研究员介绍给我的。他说那边一直使用这个方法。所以我就没多考虑 直接拿来用了……

hzangs

yy8651 发表于 2015-4-26 15:37
那是拿普通的血清直接离心11000g？不需要稀释吗？

我确实没有稀释。

hzangs

wooway 发表于 2015-5-27 20:49
想问一下你打的频率，剂量，还有周期。。。。。我准备打大鼠。。。。

每周两次，一次2-3ug ，连续打1个月  打的小鼠

hzangs

kadak007 发表于 2015-7-3 15:55
请问下，我打算在用exo做小鼠功能实验前，先进行细胞实验。如果exo来源是人细胞系，那我选用细胞时，是选人 ...

都可以的。