外泌体处理细胞

惜名 · 发表于 2015-7-21 08:49:04

本帖最后由惜名于 2015-7-21 08:54 编辑

kadak007 发表于 2015-7-20 20:56
版主，请指导下，PBS-exo处理细胞，你一般让它们共同孵育多久呢？按小时算，还是按天算？ ...

这个恐怕得看你的exo通过什么途径发挥作用、以及你要检测什么。
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如果你推测exo可以通过膜表面蛋白作用，那么时间应该是很快的，只要exo和细胞接触就可以作用了。然后你如果要检测mRNA表达，数小时就可以了。如果做蛋白，那就得16-24小时。
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如果你推测exo是通过里面的miRNA作用，那么时间就得参照转染miRNA的了，例如，我看到的文献一般是在转染miRNA 36小时做检测。因为miRNA进到细胞还需要如靶序列结合、然后作用。

kadak007 · 发表于 2016-3-14 16:05:43

惜名发表于 2015-7-21 08:49
这个恐怕得看你的exo通过什么途径发挥作用、以及你要检测什么。
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如果你推测exo可以通过膜 ...

惜名版主，留言中提到 “做蛋白，16-24小时”，这个经验最开始有没有文献出处呢？可否推荐下？

lucida1973 · 发表于 2016-7-15 03:16:47

这个帖子太需要了，谢谢给位的分享！！！！

中义 · 发表于 2016-9-29 13:49:23

感谢各位大神精彩讨论，学习学习！！！

ashey · 发表于 2016-10-13 17:08:21

向荣y 发表于 2015-4-20 13:11
多谢惜名！！我用的间充质干细胞外体，180ML上清重悬到1.2ml的PBS中，加到种有肿瘤细胞的96孔板里，做了 ...

你好，现在准备肿瘤细胞培养上清外泌体处理细胞了，不知道你180ml上清提取的外泌体浓度大概是多少啊？做MTT实验时加入最大外泌体浓度体积是多少？

lucida1973 · 发表于 2016-10-31 19:37:25

惜名发表于 2015-4-16 11:08
用外泌体干预细胞没有可参考的依据。你可以自己做个浓度梯度，在我看的有限的文献里，似乎都没有提外泌体浓 ...

马克一下

雪岭御剑 · 发表于 2017-2-22 15:57:24

丁倩倩发表于 2015-4-16 20:57
我之前看的一篇文献10-50ug/mll都是可以的，200ug/ml以上会有脂毒性（我老板对这种说法一直嗤之以鼻，认为 ...

请问你说的10微克每毫升是每次换液都加一次这么多外泌体吗？

atlanticocean · 发表于 2017-11-13 08:14:05

惜名发表于 2015-7-2 10:02
我用SBI提取的exo，得率之高令人乍舌。。。
所以我给出的浓度可能不是很准确，混杂了一些细胞培养液中的 ...

多大的孔？96孔板的孔？

赤道的边际 · 发表于 2020-12-9 12:53:07

惜名发表于 2015-7-8 10:54
这篇Nature immunology ，exo干预细胞基本都是用的5ug/ml；
这篇circulation 用的是exo粒子数定量。
这篇 ...

请问外泌体处理细胞时是直接加进去孵育吗？多久时间呢？需要spin down处理去孵育吗？

minterist · 发表于 2021-7-29 17:03:36

丁倩倩发表于 2015-4-16 20:57
我之前看的一篇文献10-50ug/mll都是可以的，200ug/ml以上会有脂毒性（我老板对这种说法一直嗤之以鼻，认为 ...

请问具体哪篇文章能分享一下吗？谢谢啦

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