关于细胞培养上清中提取外泌体的相关问题

qyjinghui

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-1 23:36
这个很难给你确切答案，不同的细胞系分泌exosome的能力不一样，对血清饥饿的耐受不一样。你可以上pubmed或g ...

老师您好，想跟您咨询一个问题。我们打算用药物处理脐带间充质干细胞，然后对比处理后和处理前外泌体内容物miRNA的差异。我们对P3代的细胞进行处理，在70％汇合度的时候加药处理2天，这时候细胞已经长满了，先不传代，我再用不含血清的培养基继续进行饥饿培养，48h后收集上清进行超离。还是加药处理2天等细胞长满了，传代之后再用不含血清的培养基饥饿培养，在收集上清进行超离呢？谢谢您的回答。

qyjinghui

tshenbin 发表于 2017-8-2 21:57
建议你用Amicon Ultra-15 100K NMWL进行超滤浓缩，这样可以减少上清体积。

请教老师超滤的转速，最后需要用多少pbs冲洗滤膜，收集外泌体成分呢？

qyjinghui

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-1 23:36
这个很难给你确切答案，不同的细胞系分泌exosome的能力不一样，对血清饥饿的耐受不一样。你可以上pubmed或g ...

还有个问题想请教老师，我们想研究加药处理后细胞外泌体内容物的改变，看到过两种方式，1.加药处理2天后，连同药物和培养液一起丢弃，添加新的培养基继续培养收集外泌体。2.加药处理2天后，将含有药物的培养液收集并分离外泌体成分。这两种哪个方法更科学呢。感谢回答，谢谢