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2014年发表--细胞外囊泡鉴定和功能研究的最少实验要求

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发表于 2017-12-9 14:37:09 | 显示全部楼层 |阅读模式
定义的细胞外囊泡及其功能的最少实验要求:国际细胞外囊泡学会的声明

今天hzangs为大家介绍一下国际细胞外囊泡学会于2014年发布的一个指导性声明文件,文件指出了目前研究和定义细胞外囊泡及其功能所需要的最少实验要求。这个声明文件发表在《细胞外囊泡杂志》上。目前该声明正在筹划更新。大家可以多多关注一下。

摘要:分泌膜包裹的囊泡统称为胞外囊泡(EV),其包括外泌体,外膜泡,微泡,微粒,凋亡小体和其他EV亚群。细胞外囊泡近些年在生物学和医学领域迅速发展。 但是目前在技术上很难获得一个完全纯净的不含非囊泡成分的细胞外囊泡样品用于功能研究,因此需要建立一个分析和鉴定这些囊泡特性及生物学功能的指导方针来规范目前细胞外囊泡领域内的科学研究。在这里,国际细胞外囊泡学会(ISEV)为研究人员提供了一个最少的集合了生物化学,生物物理和功能标准的规范化文件,这一文件对细胞外囊泡及其内含物的鉴定和功能分析进行了规范化。


这篇文章主要从以下几个方面对细胞外囊泡的研究方法进行了规范化要求:
Minimal requirements to claim the presence of EVs in isolates;证明样品中存在细胞外囊泡的最低实验要求;
General characterization of EVs;细胞外囊泡的一般特性;
Characterization of single vesicles;对单个膜泡进行定性分析;
Studies of the functional activity of EVs:recommendations for controls;细胞外囊泡功能研究:建议设置合理对照组;

下面从各个方面大体介绍一下:
Minimal requirements to claim the presence of EVs in isolates;证明样品中存在细胞外囊泡的最低实验要求。
文章指出:定义细胞外囊泡的首要标准之一是他们是从细胞外液中分离出来,即从条件化的细胞培养基或体液。含有EV的液体的收集必须温和,限制细胞膜的破坏。分离的“金标准”目前尚无共识,因此研究者不应该声称使用了“最佳”的方法。分离方法的选择取决于下游的具体科学问题。我们敦促研究人员详细描述用于EV隔离的方法,以方面其他研究人员理解和重复。

General characterization of EVs;细胞外囊泡的一般特性;
这一部分文章中提及了目前应当使用WB或者流式细胞仪分析囊泡所携带的蛋白标志物,并给出了列表。
Characterization of single vesicles;对单个膜泡进行定性分析;
该部分文章指出我们应当使用电子显微镜或原子力显微镜对囊泡样品进行成像分析,证实膜泡结构。同时应当测量大量膜泡的粒径分布。原文这样说:“除了单个囊泡的特写图像之外,图像应该显示包括多个囊泡的广泛的区域。对于较大的囊泡如凋亡小体,可以提供cytospins和/或免疫荧光图像以提供囊泡分离的概述,并且图像不集中在单个囊泡。 细胞外囊泡的尺寸分布测量,例如纳米颗粒跟踪分析,动态光散射或电阻脉冲感测提供了大量囊泡的直径。 使用这些技术获得的数值应该与TEM,AFM或其他显微镜技术的图像联合展示。”

Studies of the functional activity of EVs: recommendations for controls;细胞外囊泡功能研究:建议设置合理对照组;
这一部分主要说明有一下几个注意事项。1、体内实验时应该证明囊泡带来的表型具有剂量依赖效应。2、设置阴性对照应该充分考虑囊泡功能,阴性对照应该展示出最小的功能影响“which should exhibit minimal functional effects.” 3、“An alternative approach to link functional activity, or specific molecules, with isolated EVs may be based upon antibody-mediated capture or depletion of EVs from the biofluid or conditioned medium. The antibodies used should be specific to the transmembrane protein of the characterized EVs.”即 功能验证应当考虑在使用EV特异性抗体获得EV,进行试验能够产生表型,而使用EV特异性抗体去除EV后,EV带来的表型会消失。
这里只是做一个初步介绍给大家。具体的内容大家请参考原文献。
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