BCA测蛋白浓度问题

梦想照进现实

六月の雪 发表于 2015-5-31 13:49
40多ML的上清，用超滤管浓缩到5mL，再加SBI试剂过夜才能看到肉眼可见的沉淀，加了200ulPBS重悬，约了下周 ...

用超滤管浓缩后，是按5ml的量来算SBI试剂的吗？效果怎样呀！最近准备开始做，拿不准要多少上清。求助！

ashey

kadak007 发表于 2015-6-8 19:46
我这里裂解后没有再次重悬离心

不考虑外泌体膜碎片之类的影响吗？

kadak007

ashey 发表于 2015-6-8 14:29
新人一枚，想问下，RIPA裂解后不需要重悬再离心嘛？离心的话用多大转速呢？ ...

我这里裂解后没有再次重悬离心

ashey

新人一枚，想问下，RIPA裂解后不需要重悬再离心嘛？离心的话用多大转速呢？

kadak007

hexiaoke 发表于 2015-6-2 13:43
不知道楼主后面是怎么做的呢？我也想知道用什么裂解液和取多少体积的裂解液 ...

今天用RIPA裂解液试一下，按1:1加，貌似效果还行

hexiaoke

不知道楼主后面是怎么做的呢？我也想知道用什么裂解液和取多少体积的裂解液

kadak007

六月の雪 发表于 2015-5-31 13:49
40多ML的上清，用超滤管浓缩到5mL，再加SBI试剂过夜才能看到肉眼可见的沉淀，加了200ulPBS重悬，约了下周 ...

好的，多谢啊，祝实验顺利，常交流~

六月の雪

kadak007 发表于 2015-5-29 17:56
终于碰到同道了，幸会幸会啊    我打算下周BCA下
你是用多少体积培养上清提取啊？然后加pbs多 ...

40多ML的上清，用超滤管浓缩到5mL，再加SBI试剂过夜才能看到肉眼可见的沉淀，加了200ulPBS重悬，约了下周做电镜，裂解液是长期合作的一家国产公司自配自卖的，不算是什么品牌

kadak007

六月の雪 发表于 2015-5-29 12:06
楼主也做胰腺癌？同道中人啊
我用的SBI试剂，用PBS重悬后，取个10-20ul出来加裂解液（因为剩下的还想着 ...

终于碰到同道了，幸会幸会啊    我打算下周BCA下
你是用多少体积培养上清提取啊？然后加pbs多少微升重悬呢？是哪种品牌裂解液？
我之前也用SBI试过，完全按说明操作后，并未出现肉眼可见的白色物，象征性的PBS重悬后，电镜下似有似无的有那么几个泡泡。你是怎么处理？

六月の雪

楼主也做胰腺癌？同道中人啊
我用的SBI试剂，用PBS重悬后，取个10-20ul出来加裂解液（因为剩下的还想着孵育其他细胞观察个现象啥的）
BCA测浓度，裂解液不敢加多了，第一次做都是尝试，我用了30ul裂解液（我现在觉得加10ul裂解液都够了= =），测的蛋白浓度挺低的，
这个貌似没有成熟方案吧，都是摸着石头过河，有结果就成~