BCA测蛋白浓度问题

kadak007

六月の雪 发表于 2015-5-31 13:49
40多ML的上清，用超滤管浓缩到5mL，再加SBI试剂过夜才能看到肉眼可见的沉淀，加了200ulPBS重悬，约了下周 ...

好的，多谢啊，祝实验顺利，常交流~

hexiaoke

不知道楼主后面是怎么做的呢？我也想知道用什么裂解液和取多少体积的裂解液

kadak007

hexiaoke 发表于 2015-6-2 13:43
不知道楼主后面是怎么做的呢？我也想知道用什么裂解液和取多少体积的裂解液 ...

今天用RIPA裂解液试一下，按1:1加，貌似效果还行

ashey

新人一枚，想问下，RIPA裂解后不需要重悬再离心嘛？离心的话用多大转速呢？

kadak007

ashey 发表于 2015-6-8 14:29
新人一枚，想问下，RIPA裂解后不需要重悬再离心嘛？离心的话用多大转速呢？ ...

我这里裂解后没有再次重悬离心

ashey

kadak007 发表于 2015-6-8 19:46
我这里裂解后没有再次重悬离心

不考虑外泌体膜碎片之类的影响吗？

梦想照进现实

六月の雪 发表于 2015-5-31 13:49
40多ML的上清，用超滤管浓缩到5mL，再加SBI试剂过夜才能看到肉眼可见的沉淀，加了200ulPBS重悬，约了下周 ...

用超滤管浓缩后，是按5ml的量来算SBI试剂的吗？效果怎样呀！最近准备开始做，拿不准要多少上清。求助！

暮色恭喜发财

ashey 发表于 2015-6-9 17:25
不考虑外泌体膜碎片之类的影响吗？

裂解后看不到碎片的

yy8651

惜名 发表于 2015-5-29 07:58
一直用试剂盒的孩子路过。。。
对超离的得率一点概念都没有，坐等版主来回答 ...

你用的哪个盒子？需要用多少细胞上清能提到多少？

惜名

yy8651 发表于 2015-7-31 21:02
你用的哪个盒子？需要用多少细胞上清能提到多少？

我用SBI的，4-6ml上清即可看到少许沉淀。
当然，各个细胞分泌exo的能力不同，所以你还是要摸索一下。