用kit提的外泌体可否用于细胞/动物实验？

惜名

这么久没人回复，我来做个沙发吧。。。
1、kit提exo用上清量建议初始为10ml（SBI），还要根据你的细胞分泌能力摸索、调整上清量；简单超离+kit，没听说过，但是我用Millipore的超滤过浓缩一下再加kit会省点钱。。。
2、这个你自己看着办吧，最好自己摸浓度。或者在体外做一下，观察到现象后，再估计体内的浓度。文献报道差异太大。。。
3、体内追踪可以用DiR标记，详见参考文献1.我也看到过用GFP标记CD63，然后拍共聚焦，似乎操作难度大很多。。。
4、目前越来越多的文献关注exo表面蛋白的生物学作用，我个人经验，如果需要放置24小时以上，我都会转移至-80或-40，因为这样才能最大程度保存蛋白活性。

参考文献
1.Extracellular vesicle in vivo biodistribution is determined by cell source, route of administration and targeting. Journal of Extracellular Vesicles 2015.

惜名

wenzhouzsl 发表于 2015-6-29 08:52
惜名大师好，您提到“用Millipore的超滤过浓缩一下再加kit会省点钱”
我想问问，超滤管您用多少kDa的？超 ...

大师不敢当。。。业余搞科研，灌点水文章准备毕业了。。。
用100kd的，也是从Johnny版主那里借鉴的方法。用15ml上清超滤后可酌情剩0.5至数毫升。然后再加SBI试剂，后续方法不变。
这个应该没有损失吧，因为超滤管不会把exo虑走的。这样做需要考虑的问题是：液体浓缩后在用kit提取，会不会增加蛋白沉淀、因此污染最终所得的exo？。。。