SBI Exo-Quick TC提取血清exo经验与困惑

惜名

SBI的Exo-Quick有两种，一种就是Exo-Quick，说明书提示用以提取血清exo；还有一种是Exo-Quick TC，用以提取培养基或尿液exo。
我在想，培养基不就是10%FBS+DMEM之类的么，那么我如果用PBS（或DMEM、IMDM）稀释血清，制造一种类似培养基的东西，然后用Exo-Quick TC是否可以提取了呢？


抱着试试看的态度，我选择了Exo-Quick TC。
取100ul小鼠血清（分别为sham和心梗小鼠），用400ul PBS稀释，得500ul mix。加入100ul Exo-Quick TC，此时立即出现浑浊（什么情况？）
Anyway，继续做 。4度静置40min左右，1500g*30min离心，见EP管底部有较多白色沉淀。再用200ul PBS重悬吹打，得清亮、透明混合液。


鉴定不打算做了，直接做表征。观察其对靶细胞是否有作用。
欲知后事如何，且听下回分解。

惜名

Johnny 发表于 2015-7-7 17:10
立即出现浑浊是因为你稀释的血清里面蛋白和盐离子的成分过高。如果将细胞培养上清浓缩高倍数后用Exo-Quick  ...

是因为蛋白和盐过高么，之前我倒不知道这个。
吹打后是可以变成透明的，当然不是那种像纯净水一样的透明，但也不是浑浊。
我之前用Millipore超滤的时候，一般都是10ml超滤至1ml左右，其实这个浓缩程度已经很大了，但加入1/5的Exo-Quick TC，并无立即浑浊，当然，我此前用的都是无血清培养基。。。

这次提取没测浓度，我觉得测浓度没啥意义了，肉眼看到的沉淀太明显了，显然应该有不少其他杂志吧。
因为有设置了sham组和心梗组，所以打算先做做现象看。

惜名

Johnny 发表于 2015-7-8 13:03
嗯嗯，吹打后能变透明就OK

进展不错O(∩_∩)O哈！

如果不能变透明，说明什么问题呢？
是因为杂质太多么？