有囊泡相关技术问题请在该贴留言！

hzangs

psyerLD 发表于 2019-11-19 13:26
Hzangs老师，有几个问题想请教您，万分感谢！！
1.外泌体做电镜的话需要做冷冻电镜吗？
2.外泌体提取出来之 ...

1、 负染即可。如果有条件 冷冻电镜也OK
2、-80可以长期保存，几个月没问题。 冷冻过的样品 可能会存在抱团   粒径增大等情况。
3、不是，大概率你都收丢了。 一般检测的囊泡数目 应该在10^9左右。你这比大家的数据低了2个数量级

hzangs

psyerLD 发表于 2019-11-19 14:52
谢谢hzangs老师！！我看了您在杭州的那个课件，里面写了超离最后一步不要倒出上清，意思就是这一步操作的 ...

是的，

hzangs

18331131398 发表于 2019-11-20 09:05
hzang老师您好，我想问一下，我是用植物提取的外泌体，一直没找到鉴定蛋白的marker,只做了电镜和NTA，不知 ...

植物方面，我关注的很少。一般认为  植物方面释放的 只能叫做囊泡，不叫外泌体。 你可以参考一下相关的文章  看看他们怎么鉴定的。  植物蛋白跑WB  比较难， 如果其他论文也没有WB鉴定，你可以考虑不做这个实验。

hzangs

1. 用什么裂解，取决于你的实验，RIPA能搞定就 RIPA， 不能  就换。 2.如果你研究的是囊泡内蛋白，那么 蛋白酶K  是可以的

hzangs

sammyml 发表于 2019-12-3 23:21
请问大大 有没有可以查询肿瘤和正常人外泌体某个蛋白质表达量高低的数据库呀 ...

这样的数据库 目前还不完善。 RNA库相对比较完善。  这几个数据库 供你参考

http://www.exorbase.org/
http://microvesicles.org/index.html
http://www.exocarta.org/
https://exrna.org/

hzangs

liulin625 发表于 2020-1-10 12:53
您好，请教下SBI Exoquick TC 试剂盒提取外泌体的相关问题。

小鼠乳腺癌EMT6 cell line，正常培养48小时后 ...

方法和起始量问题都不大。  看不出有什么问题。 请直接咨询相关试剂盒的技术支持人员。分析是否试剂盒自身存在问题。

hzangs

liulin625 发表于 2020-1-14 12:28
好的，谢谢，张老师，会不会存在小鼠细胞系外泌体的大小与人的不一样的可能性？ ...

5000万小鼠细胞， 这个量对 基于聚合物沉淀 的试剂盒来说， 不少了

hzangs

liulin625 发表于 2020-1-14 12:28
好的，谢谢，张老师，会不会存在小鼠细胞系外泌体的大小与人的不一样的可能性？ ...

大小上  不存在那么大的差别。

hzangs

Mr-summerr 发表于 2020-1-16 14:42
hzangs老师你好，想请教下既然去年那篇文献Reassessment of Exosome Composition证明dsDNA是直接排到细胞外 ...

去年那篇文章只能说  DNA可能不在囊泡中。  如果你关注一下这个领域就会发现，前段时间 又出了一篇大文章。  介绍 肿瘤来源的外泌体  确实会有大约10%左右 携带有DNA。

hzangs

仙逆清水 发表于 2020-1-18 17:04
各位前辈好，有个外泌体LncRNA验证的问题想咨询一下，由于外泌体测序的时候用光了两个样本RNA，现在qPCR验 ...

如果是细胞系的话  还好。 再收一次外泌体，测qPCR 能部分说明问题。  如果是人样本的话   那就不好办了