有囊泡相关技术问题请在该贴留言！

hollychao

hzangs 发表于 2020-6-11 15:24
抱歉，这个真没做过。 但是按照你的描述来说， 没什么问题，你可以按照细胞质中蛋白的 ELISA 方法 来操作 ...

好哒~谢谢大神~~

ypf123

我想问一下，什么细胞提取的外泌体的量比较多

liulin625

最近准备从血浆中提取外泌体，有qEv和蔗糖垫两种备选方案，不知版主有什么推荐，是否可以分享下提取方法，蔗糖垫一定要重水配置么，有人说PBS也可以，求大家指导，谢谢

hzangs

liulin625 发表于 2020-10-10 11:51
最近准备从血浆中提取外泌体，有qEv和蔗糖垫两种备选方案，不知版主有什么推荐，是否可以分享下提取方法， ...

目前血浆中提取细胞外囊泡的主流做法 是密度梯度离心（蔗糖垫 是简化的密度梯度离心策略）

future1994

您好hzangs大神，最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体，用的贝克曼的水平转子，第一遍超速离心后可以看到管底有胶冻样沉淀，我官底就留了大约300ul左右，加上PBS重悬后第二遍基本看不见了，这一步上清需要去除干净吗？
我之前两部超离后上清都送的很干净，去做了电镜，什么都没找到，请问应该先做什么NTA还是TEM呢

hzangs

future1994 发表于 2020-12-13 10:52
您好hzangs大神，最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体，用的贝克曼的水平转子，第一遍超速离心后可以看 ...

密度梯度离心，需要回收特定密度区段…   未必是在管底，这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在2006年发表的protocol

future1994

hzangs 发表于 2020-12-14 09:46
密度梯度离心，需要回收特定密度区段…   未必是在管底，这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在 ...

不好意思，hzangs前辈，我说错了，是在用超速离心提取血浆来源外泌体，因为我们实验室只有水平转子，所以沉淀是在管底，这几次看到了在管底有些油状或胶冻样沉淀，但是贴壁不牢固，可以随液面有晃动，我就留了一些，后来用PBS重悬后再超速离心就什么都看不到了。离心完我就把所有上清都去掉了，用50~100ulPBS重悬，但是BCA结果也就在0.8ug/ul(每管是2ml血浆)，做了一次电镜也没看到，请问整个操作过程有什么需要改进的地方吗，谢谢大神老师！

hzangs

future1994 发表于 2020-12-17 13:45
不好意思，hzangs前辈，我说错了，是在用超速离心提取血浆来源外泌体，因为我们实验室只有水平转子，所以 ...

血浆中的细胞外囊泡分离纯化， 单纯使用一种策略进行分离，基本都不会很成功。 建议你考虑超速离心+凝胶排阻层析试试。

yangduoduo0311

hzangs大神，你好，最近在造动物模型，要用GW4869抑制外泌体 ，找了问多文献，想咨询一下，外泌体抑制的动物浓度是多少，是1.25mg/kg吗？？？我看到好多文献里面写的是这个浓度..求大神翻牌子！！！

future1994

hzangs 发表于 2020-12-18 22:04
血浆中的细胞外囊泡分离纯化， 单纯使用一种策略进行分离，基本都不会很成功。 建议你考虑超速离心+凝胶 ...

哦哦，谢谢大神，我再查一下