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楼主: hzangs

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 楼主| 发表于 2018-7-11 15:42:11 | 显示全部楼层
yazisummer 发表于 2018-7-11 10:29
hzangs大神!
我用原代培养的细胞,无FBS培养基饥饿48小时后,收取上清,4度存放了两天。20,000g 4度离心20 ...

强调好多遍了……    这种问题我真不想再回答了…… 最后一次……

原代细胞本来分泌量就低,所以起始培养细胞量要大,起始体积至少要按百毫升算,100没有就200。   超离结束 上清不要倒, 吸走,底部留一点培液。  最好用水平转,不要用角转。  看不到沉淀没关系,只要检测有蛋白浓度  跑wb有条带  电镜有结构  NTA符合就行了。
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发表于 2018-7-17 15:15:54 | 显示全部楼层
大神,想请问下外泌体提取microRNA的具体protocol,后期荧光定量PCR用什么内参比较好操作啊
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 楼主| 发表于 2018-7-18 10:13:20 | 显示全部楼层
Megan 发表于 2018-7-17 15:15
大神,想请问下外泌体提取microRNA的具体protocol,后期荧光定量PCR用什么内参比较好操作啊 ...

论坛和公众号里很多。自己找。 不再赘述
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发表于 2018-7-18 17:42:13 | 显示全部楼层
您在初识外泌五,有提到抽提外泌体用TAKARA的9094,我也用了,之前咨询过技术,他们回复得到水相之后按照说明书加无水乙醇沉淀RNA, 您在文章中提到是在水相中加两个添加剂之后,按通常的做法加异丙醇沉淀,不按说明书而是加异丙醇的效果会更好?
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 楼主| 发表于 2018-7-22 22:17:10 | 显示全部楼层
pfdsj 发表于 2018-7-18 17:42
您在初识外泌五,有提到抽提外泌体用TAKARA的9094,我也用了,之前咨询过技术,他们回复得到水相之后按照说 ...

说明书里是沉淀DNA的。 咱们是要抽提RNA,能一样么亲    请按照我的方法来!
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发表于 2018-8-29 06:10:46 | 显示全部楼层
初入外泌体,常在文献中看到用多少浓度的外泌体treat, 或者收获后测得外泌体浓度是多少,想问下这个浓度是怎么测得的呢?怎么知道我的样本离心或者使用kit提取之后的外泌体浓度是多少。搜索了半天总是找不到关键的答案,希望能得到您的解答,谢谢!
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发表于 2018-9-12 20:38:30 | 显示全部楼层
您好,我是细胞上清提外泌体,想看两个细胞共培养后,有没有特殊因子的上调,除了做外泌体的蛋白组学还能不能用离心后上清提的蛋白再做蛋白组学呢?大神,你知道有没有人这样做过呢?
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 楼主| 发表于 2018-9-12 23:50:32 | 显示全部楼层
nixiao 发表于 2018-9-12 20:38
您好,我是细胞上清提外泌体,想看两个细胞共培养后,有没有特殊因子的上调,除了做外泌体的蛋白组学还能不 ...

你只是想看分泌组有没有变化。  直接沉淀所有的胞外蛋白就可以。 如果特异性的想看外泌体中是否有因子变化 才需要做外泌体的蛋白质组学。
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发表于 2018-11-9 20:36:49 | 显示全部楼层
请问,提取完外泌体后,需要用多少浓度处理细胞?如何处理,是直接将外泌体添加到待处理的细胞上清液中么
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 楼主| 发表于 2018-11-23 11:39:43 | 显示全部楼层
z6234206 发表于 2018-11-9 20:36
请问,提取完外泌体后,需要用多少浓度处理细胞?如何处理,是直接将外泌体添加到待处理的细胞上清液中么 ...

不同细胞 不同功能研究不一样。  你需要自己去摸索
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