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楼主: hzangs

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发表于 2020-6-14 22:22:54 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2020-6-11 15:24
抱歉,这个真没做过。 但是按照你的描述来说, 没什么问题,你可以按照细胞质中蛋白的 ELISA 方法 来操作 ...

好哒~谢谢大神~~
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发表于 2020-7-9 18:23:39 | 显示全部楼层
我想问一下,什么细胞提取的外泌体的量比较多
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发表于 2020-10-10 11:51:26 来自手机 | 显示全部楼层
最近准备从血浆中提取外泌体,有qEv和蔗糖垫两种备选方案,不知版主有什么推荐,是否可以分享下提取方法,蔗糖垫一定要重水配置么,有人说PBS也可以,求大家指导,谢谢
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 楼主| 发表于 2020-10-11 12:54:58 | 显示全部楼层
liulin625 发表于 2020-10-10 11:51
最近准备从血浆中提取外泌体,有qEv和蔗糖垫两种备选方案,不知版主有什么推荐,是否可以分享下提取方法, ...

目前血浆中提取细胞外囊泡的主流做法 是密度梯度离心(蔗糖垫 是简化的密度梯度离心策略)
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发表于 2020-12-13 10:52:03 | 显示全部楼层
您好hzangs大神,最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体,用的贝克曼的水平转子,第一遍超速离心后可以看到管底有胶冻样沉淀,我官底就留了大约300ul左右,加上PBS重悬后第二遍基本看不见了,这一步上清需要去除干净吗?
我之前两部超离后上清都送的很干净,去做了电镜,什么都没找到,请问应该先做什么NTA还是TEM呢
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 楼主| 发表于 2020-12-14 09:46:39 | 显示全部楼层
future1994 发表于 2020-12-13 10:52
您好hzangs大神,最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体,用的贝克曼的水平转子,第一遍超速离心后可以看 ...

密度梯度离心,需要回收特定密度区段…   未必是在管底,这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在2006年发表的protocol
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发表于 2020-12-17 13:45:34 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2020-12-14 09:46
密度梯度离心,需要回收特定密度区段…   未必是在管底,这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在 ...

不好意思,hzangs前辈,我说错了,是在用超速离心提取血浆来源外泌体,因为我们实验室只有水平转子,所以沉淀是在管底,这几次看到了在管底有些油状或胶冻样沉淀,但是贴壁不牢固,可以随液面有晃动,我就留了一些,后来用PBS重悬后再超速离心就什么都看不到了。离心完我就把所有上清都去掉了,用50~100ulPBS重悬,但是BCA结果也就在0.8ug/ul(每管是2ml血浆),做了一次电镜也没看到,请问整个操作过程有什么需要改进的地方吗,谢谢大神老师!
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 楼主| 发表于 2020-12-18 22:04:29 | 显示全部楼层
future1994 发表于 2020-12-17 13:45
不好意思,hzangs前辈,我说错了,是在用超速离心提取血浆来源外泌体,因为我们实验室只有水平转子,所以 ...

血浆中的细胞外囊泡分离纯化, 单纯使用一种策略进行分离,基本都不会很成功。 建议你考虑超速离心+凝胶排阻层析试试。
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发表于 2020-12-22 09:04:13 | 显示全部楼层
hzangs大神,你好,最近在造动物模型,要用GW4869抑制外泌体 ,找了问多文献,想咨询一下,外泌体抑制的动物浓度是多少,是1.25mg/kg吗???我看到好多文献里面写的是这个浓度..求大神翻牌子!!!
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发表于 2020-12-22 22:26:30 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2020-12-18 22:04
血浆中的细胞外囊泡分离纯化, 单纯使用一种策略进行分离,基本都不会很成功。 建议你考虑超速离心+凝胶 ...

哦哦,谢谢大神,我再查一下
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