外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

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楼主: hzangs
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 楼主| 发表于 2020-2-2 08:17:59 | 显示全部楼层
骑在银龙背上 发表于 2020-1-21 15:37
请问用qiagen的exoEasy试剂盒提取的外泌体直接共孵育好像因为XE洗脱液的问题对细胞有损伤,用什么办法能将 ...

这个问 他们的技术人员。  我们没有进行过相关尝试
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 楼主| 发表于 2020-2-2 08:18:27 | 显示全部楼层
changlong 发表于 2020-2-1 17:27
冻存3-5年的血清样本提外泌体的效果怎么样呢,谢谢

只要没反复冻融过, 基本不会有什么问题。
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 楼主| 发表于 2020-6-11 15:24:56 | 显示全部楼层
hollychao 发表于 2020-6-9 20:44
请教hzangs大神~做ELISA测外泌体内的蛋白之前,是样本(外泌体悬浮液)和RIPA=1:1来裂解外泌体的吗的吗? ...

抱歉,这个真没做过。 但是按照你的描述来说, 没什么问题,你可以按照细胞质中蛋白的 ELISA 方法 来操作
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 楼主| 发表于 2020-10-11 12:54:58 | 显示全部楼层
liulin625 发表于 2020-10-10 11:51
最近准备从血浆中提取外泌体,有qEv和蔗糖垫两种备选方案,不知版主有什么推荐,是否可以分享下提取方法, ...

目前血浆中提取细胞外囊泡的主流做法 是密度梯度离心(蔗糖垫 是简化的密度梯度离心策略)
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 楼主| 发表于 2020-12-14 09:46:39 | 显示全部楼层
future1994 发表于 2020-12-13 10:52
您好hzangs大神,最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体,用的贝克曼的水平转子,第一遍超速离心后可以看 ...

密度梯度离心,需要回收特定密度区段…   未必是在管底,这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在2006年发表的protocol
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 楼主| 发表于 2020-12-18 22:04:29 | 显示全部楼层
future1994 发表于 2020-12-17 13:45
不好意思,hzangs前辈,我说错了,是在用超速离心提取血浆来源外泌体,因为我们实验室只有水平转子,所以 ...

血浆中的细胞外囊泡分离纯化, 单纯使用一种策略进行分离,基本都不会很成功。 建议你考虑超速离心+凝胶排阻层析试试。
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