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future1994

您好hzangs大神，最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体，用的贝克曼的水平转子，第一遍超速离心后可以看到管底有胶冻样沉淀，我官底就留了大约300ul左右，加上PBS重悬后第二遍基本看不见了，这一步上清需要去除干净吗？
我之前两部超离后上清都送的很干净，去做了电镜，什么都没找到，请问应该先做什么NTA还是TEM呢

future1994

hzangs 发表于 2020-12-14 09:46
密度梯度离心，需要回收特定密度区段…   未必是在管底，这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在 ...

不好意思，hzangs前辈，我说错了，是在用超速离心提取血浆来源外泌体，因为我们实验室只有水平转子，所以沉淀是在管底，这几次看到了在管底有些油状或胶冻样沉淀，但是贴壁不牢固，可以随液面有晃动，我就留了一些，后来用PBS重悬后再超速离心就什么都看不到了。离心完我就把所有上清都去掉了，用50~100ulPBS重悬，但是BCA结果也就在0.8ug/ul(每管是2ml血浆)，做了一次电镜也没看到，请问整个操作过程有什么需要改进的地方吗，谢谢大神老师！

future1994

hzangs 发表于 2020-12-18 22:04
血浆中的细胞外囊泡分离纯化， 单纯使用一种策略进行分离，基本都不会很成功。 建议你考虑超速离心+凝胶 ...

哦哦，谢谢大神，我再查一下