关于science上一篇paper的电镜图的疑问

躺在雪地里的羊

大家好，前段时间science发了一篇关于外泌体的文章，我对这篇文章的电镜图有些疑问。
这篇文章是从原代脂肪组织培养上清中分离的外泌体，分离的方法是凝胶排阻。电镜的具体流程摘录如下：
After collecting the exosome fraction from lean or obese adipose tissueconditioned medium, paraformaldehyde was added to each sample (2% vol/vol). Samples were airdried on Formvar-carbon-coated grids, negative stained with uranyl acetate, and washed. Gridswere examined under a JEOL JEM-1200 EXII electron microscope. Images were captured with anORCA-HR digital camera and recorded with image capturing software (AMT Image CaptureEngine, Advanced Microscopy Techniques, Corp).
电镜图中的bar是200nm，可以看到电镜中的囊泡基本都是圆球状，没有典型的茶托状的结构，并且尺寸也基本在50nm左右甚至更小。另外，和panel G中的NTA结果对比（mean diameter: 118 ± 57 nm; median: 102 nm），电镜的结果也偏小。
关于这样的结果，我主要有两个疑问：
1. 为什么TEM的结果会比NTA偏小？这是由于两种方式的不同测量原理所带来的系统误差吗？
2. 为什么TEM的结果显示出的尺寸、形状都与传统的认知不太一样，是因为凝胶排阻这一特定的分离方式造成的吗？我还看过其他一些文献，也是用凝聚排阻这一方法分离的外泌体，似乎展示出了相似的电镜特点。（Chang-Sook Hong, Sonja Funk, Laurent Muller, Michael Boyiadzis & Theresa L. Whiteside (2016) Isolation of biologically active and morphologically intact exosomes from plasma of patients with cancer, Journal of Extracellular Vesicles, 5:1, 29289, DOI: 10.3402/jev.v5.29289）
如有大神能帮忙解答，不胜感激！

躺在雪地里的羊

baishixiaoyaozi 发表于 2019-4-2 01:12
凝胶排阻色谱只能根据颗粒大小进行分离。
某些样品如血浆，以及文中所提到的原代脂肪细胞培养液上清中还含 ...

非常感谢您的解答，也感谢您分享的文章！那一般是通过检测apoB的水平来检测lipoprotein的污染吗？还有就是关于电镜下exosome形态的问题，这篇文章里的电镜里都是比较均质的球结构，难道它们都是lipoprotein吗QAQ

躺在雪地里的羊

hzangs 发表于 2019-4-2 12:05
撇开这篇文章。 我先回答你的两个问题。
1、电镜粒径和NTA粒径的差别。 理论上讲，电镜的粒径确实会比NTA粒 ...

非常感谢您细致的解答还有您的建议！学习啦！非常感谢~

躺在雪地里的羊

hereissyk 发表于 2019-4-9 09:43
补充一点，茶托样结构是复染这个操作造成的，与分离方法无关，冷冻电镜做出来的就是圆滚滚的。 ...

谢谢您的补充！感谢！