PKH67染色

惜名

是时候亮出这篇文献了：Cardiac fibroblast-derived microRNA passenger strand-enriched exosomes mediate cardiomyocyte hypertrophy.



这篇文献用1ml Diluent C稀释，为了省钱，我降低到了0.3-0.5ml；效果一样赞~

惜名

wenzhouzsl 发表于 2015-8-28 15:51
惜大师，您说“Diluent C 降到了0.3-0.5ml"，也就是说PKH降到了1.3-2ul，对不？请问您的exosome有没有定 ...

大师不敢当
PKH还是4ul。exo只定量过一次，刚开始做鉴定时定量的，后来做功能都没定量（太费）。根据刚开始做定量的估计，exo为10-20ug（溶解在100ul PBS里面）。

惜名

yy8651 发表于 2015-8-28 19:24
用什么方法定量？

蛋白。

惜名

wooway 发表于 2015-9-16 14:23
我想请教下如果我这里没有超速离心机，可否染色后再用EXOquick提取外泌体呢？大家是否有做过 ...

可以。
我就是这么干的。

惜名

巧露娜 发表于 2015-9-17 18:05
请问可以用EXOquick提取之后在染色吗

可以啊。。。
提取方法和染色没关系的，随便你染前怎么提、染后怎么提。。

惜名

我用SBI的试剂盒。
有时直接按照1：5加kit试剂，有时先用millipore滤器浓缩一下，然后再按1：5加kit试剂
离心后看到沉淀就是exosome了。
当然，会有一些其他蛋白杂质。。。

惜名

巧露娜 发表于 2015-9-18 08:33
请问SBI公司有代理商吗，在网上都找不到的，谢谢

国内是吉泰在代理，你可以去官网看看呢~
http://www.genetimes.com.cn/

惜名

wanghx_85 发表于 2015-12-16 11:58
惜名版主，请问没有超离机，用SBI试剂盒提取外泌体的话该怎么染色呢？没太明白大家的讨论呢，难道是先SBI ...

对的，就是你说的步骤。

惜名

wanghx_85 发表于 2015-12-16 12:03
还有您说的染色后再用试剂盒提是什么意思啊？如果提取之前染的话不是染的细胞的细胞膜么？而外泌体不是要 ...

1、提取外泌体，用SBI的exoquick。
2、提取后按照那篇JCI的步骤染色PKH67，此时染的是exo
3、染色结束后，再次用SBI的exoquick提取exosome。

惜名

wanghx_85 发表于 2015-12-16 12:09
谢谢惜名版主，太感动了，没想到您秒回啊，能否再简单说下先染后提的方法，其实我就是想知道有 ...

啊，省试剂啊，哈哈~
1、提取exo的时候可以先用Millipore的管子浓缩一下
2、用PKH67染色的时候，PBS-exo以及Dilute C都可以适当减量，后面加的BSA中和液也可以减量，把最后总的体积控制在0.6-1.0ml效果还是不错的。