求助：外泌体的分离纯化得到的DLS数据接近1000nm（超离）

nanobio

各位大牛，请教一下，如题。我用的是肿瘤细胞上清，3-5个T75 的培养瓶，无血清培养基培养24-48h，收集上清（50ml左右）后，采用梯度离心法。具体步骤是：300g 4℃ 10min，2000g 4℃ 30min，10000g 4℃ 30min都是吸走上清，弃沉淀，然后100000g离心70min，1mlPBS重悬后过0.22um的滤膜，再次100000g离心70min，沉淀用50ulPBS重悬。取30ul用PBS稀释至3ml，粒度仪检测粒径约1000nm，小峰看不到。以前用这个方法做出来的是84nm，不知道问题出在哪里了。感觉有点问题的是10000g和第一次100000g离心没有见到肉眼可见的沉淀。请问这是怎么回事？谢谢各位！

nanobio

谢谢回复！ 关于您的问题：1. 我们用的贝克曼的超速离心机，用的344058离心管，重悬后，加满液体（这是仪器要求）。重悬和离心都是在超离管中进行的。
2. 我以前用过两瓶巨噬细胞（T75）,得到的外泌体能看到沉淀。虽然以前的液体多，但是细胞数量没有现在多，我看文献说外泌体的数量多少是和细胞数量和类型有关的，所以感觉上清液的体积不是太重要。当然thery C 2006年的protocol说至少用7个10cm的皿，生长面积约55*7 cm2 。看来是需要增加细胞上清的体积。