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请教采用差速超速离心法提取血清外泌体的方法

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发表于 2021-2-18 08:18:59 | 显示全部楼层 |阅读模式
我尝试用以下方法提取外泌体
血清+PBS→4℃ 300g 离心15分钟→取上清液,4℃ 2,000g 离心30分钟→取上清液,4℃ 10,000g离心30分钟→过0.22um滤器→4℃ 10,000g离心30分钟→取上清液,4℃ 110,000g离心70分钟→弃上清,留下的沉淀加PBS→4℃ 110,000g离心70分钟→弃上清,沉淀50ulPBS重悬。
我做了TEM,结果不理想,没有看到明显的囊泡,但是WB显示有条带。
感觉还是分离方法有点问题,请教各位老师:
①分离方法还需要有哪些改进,或者有没有更成熟的方法?我查阅了文献,方法不一,离心参数不一,有些迷茫。
②有无必要应用滤器?感觉如果用滤器的话,会丢失很多囊泡。
③在第一次110,000离心70分钟后,管壁上看到了有点透明的白色的膜状沉淀,这是不是就是外泌体沉淀?但是用PBS重悬的时候非常困难。
④请教最后的沉淀用PBS重悬的时候有没有技巧?
谢谢各位,初入外泌体领域,多多指教。
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发表于 4 天前 | 显示全部楼层
滤器是为了过滤细菌,个人觉得做TEM不要求无菌,没必要用滤器。
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