咨询血浆外泌体浓度是否正常范围？

关节科小大夫

我用超速离心法提取血浆外泌体，取3ml人的血浆，超速离心后100ulPBS重悬,1:1加入RIPA，BCA测蛋白浓度，5ug/ul左右，不知道是否正常。
谢谢解答

hzangs

比较正常。

关节科小大夫

非常感谢

不止不行

我用不同超离时间提出来浓度差异比较大，可以问一下你的超离时间和速度吗？谢谢

关节科小大夫

不止不行 发表于 2021-3-24 16:02
我用不同超离时间提出来浓度差异比较大，可以问一下你的超离时间和速度吗？谢谢 ...

我用的是两次110000g 70分钟
我觉得浓度差异较大是不是和最后沉淀重悬的PBS量有关？
我的离心管只有7ml，最后我会留下2mm左右液体，没敢完全吸走......

不止不行

关节科小大夫 发表于 2021-3-25 08:17
我用的是两次110000g 70分钟
我觉得浓度差异较大是不是和最后沉淀重悬的PBS量有关？
我的离心管只有7ml， ...

我每次也会残留一点点，重悬的PBS都是差不多的，但我是35ml的大管子，感觉2h离心效果不是很好，我尝试过夜离心，得到的量就会多很多，不知道你们尝试过过个离心没？你们离心的时候会不会用PBS稀释呢，不稀释的话稠度那么高不好离下来吧

stonesli

您好，请教一下，血浆提取外泌体，需要特殊处理吗？可以分享下前期的处理吗？

15511958250

stonesli 发表于 2023-4-13 20:10
您好，请教一下，血浆提取外泌体，需要特殊处理吗？可以分享下前期的处理吗？ ...

1) 用采血针和 EDTA 抗凝管抽取全血，轻柔上下颠倒混匀后室温或者
4°C 保存，并在 1 小时内进行下一步处理；
2) 4°C 条件下，使用吊桶式转头 1900 g 离心 10 min，小心吸取上清
即为血浆，最后 500 μl 左右丢弃。得到的血浆再次离心，条件为 4°
C，3000 g，15 min，小心吸出血浆，注意不要碰到底部和侧面的
沉淀物；
3) 将血浆冻存于-80°C；
提示：送样量最好 4 ml 以上（分离 4 ml 血浆约需要 8-10 ml 全血）。