exosomes 蛋白鉴定

hzangs

惜名 发表于 2015-10-28 09:04
按照hzang的经验，只要你exo够纯，加1.5微克蛋白就足以跑出满意的条带。

我是没有用RIPA 裂解。因为我感觉 BCA蛋白定量的时候，就是二价铜离子被肽键还原成一价铜离子，然后从绿色到紫色， 铜离子是可以过膜的，而SDS-PAGE loading里又有破膜的去垢剂， 所以就直接定量直接loading了 o(╯□╰)o。

如果提的够纯，1.5ug的蛋白，一抗过夜  HRP二抗常温1小时（二抗不要叠氮化钠），压片时间10-15min 可以压到很漂亮的条带。我在论坛里秀的exosomes方面的wb图 基本都是这个方法。