外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

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问一下大家都用什么试剂破坏exosome的膜结构啊

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发表于 2015-11-10 09:58:39 | 显示全部楼层 |阅读模式
本人刚接触exosome,在使用了试剂盒得到了exosome后,不知道那种试剂适合破除exosome的膜。顺便问一下大家,破膜之后都用什么方法得到蛋白啊? 希望大家多多支持,多多回答哦。
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发表于 2015-11-10 20:55:02 | 显示全部楼层

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50ul 的exosomes PBS悬液,再加入50ul 的RIPA裂解液(强),冰上裂解30min。
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 楼主| 发表于 2015-11-11 16:36:47 | 显示全部楼层
习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液,再加入50ul 的RIPA裂解液(强),冰上裂解30min。

非常感谢呢,能不能再问一下50 ul能得到多少的蛋白啊,还有事用什么沉淀的蛋白呢?
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发表于 2015-11-11 20:00:59 | 显示全部楼层
习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液,再加入50ul 的RIPA裂解液(强),冰上裂解30min。

请问一下你RIPA加cocktail么?
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发表于 2015-11-13 09:35:36 | 显示全部楼层
微泡biomarker 发表于 2015-11-11 16:36
非常感谢呢,能不能再问一下50 ul能得到多少的蛋白啊,还有事用什么沉淀的蛋白呢? ...

取决于你从多少细胞培养上清中分离exosomes,最后用多少PBS重悬,两者比例大概是100:1,得到的exosomes蛋白接近1ug/ul。(文献上讲的有,还是多看文献吧!)
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发表于 2015-11-13 10:17:27 | 显示全部楼层
熊胖 发表于 2015-11-11 20:00
请问一下你RIPA加cocktail么?

对呀,抑制蛋白降解
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发表于 2016-2-23 15:53:42 | 显示全部楼层
学习了,谢谢
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发表于 2017-5-31 14:11:16 | 显示全部楼层
习玉峰 发表于 2015-11-13 10:17
对呀,抑制蛋白降解

请问PMSF是不是也是抑制蛋白裂解呢?
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发表于 2019-1-23 09:54:46 | 显示全部楼层
习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液,再加入50ul 的RIPA裂解液(强),冰上裂解30min。

请问冰上裂解30min后需要离心吗?离心转速是多少呀?离心时间呢?
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发表于 2019-10-9 14:21:19 | 显示全部楼层
你好,我问下细胞上的膜蛋白是不是也会存在于外泌体的膜上呀,谢谢
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