如何制备exosome-free FBS，并保证其无菌用以培养细胞？

memorywind

cherylsun 发表于 2017-7-11 00:22
请问022um过滤是指无外泌体血清过夜超速离心后取上清再进行0.22um过滤，后面都无菌操作是吗？后续要做共 ...

我用Beckman的超高速離心機，管子也都是開口的。使用前離心的鐵管蓋子會噴酒精，塑膠管會滅菌，我用的塑膠管材質可以滅菌。然後我是在無菌台裡分裝FBS到管子，蓋上鋁箔拿到外面快速秤重(鋁箔不會一起秤)，再拿回無菌台balance，離心時保持4度C，隔天離心完之後取上清直接在無菌台裡進行0.22um過濾，之後都是無菌操作。我這樣做已經離心過很多次FBS也收過很多次細胞的exosome，不會汙染，細胞也會長，看不出來和一般FBS養的細胞有什麼差異。所以用0.22um過濾應該不會太嚴重造成FBS營養流失之類的。PS.我養的是腫瘤細胞，FBS離心是100%的FBS，不會先配製成培養液在離心。