外泌体电镜拍出来是这样的，希望大家给点建议

hzangs · 发表于 2015-11-27 20:15:56

我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬，大概30ul。然后10ul上样到铜网，沉淀1min，滤纸吸掉多余液体，然后醋酸双氧铀负染1min，滤纸洗掉多余液体。然后开始准备上电镜（上机前样品应该是晾干的，准备期间就足以晾干，大概在10min左右即可） 80-120kv成像即可。

hzangs · 发表于 2015-11-30 11:47:45

怒放的生命发表于 2015-11-30 11:05
请问你是用多少的培养上清沉淀下来的exosome呢？用30ul重悬。大概蛋白能达到多少ug？ ...

100-150ml

hzangs · 发表于 2015-12-1 09:32:51

zjm337 发表于 2015-11-30 20:10
可不可以帮我看看我今天新拍的TEM。。。总觉得怪怪的呢。。谢谢！

可以

hzangs · 发表于 2015-12-1 15:44:12

看着还是不对…… 你在哪里打电镜的？　　是上海的么？

hzangs · 发表于 2015-12-2 09:42:28

zjm337 发表于 2015-12-1 22:44
不是。。中南大学。。是不是我的FBS没有分离原有的exosome，对这个有影响？还是制样有问题？制样的时候我 ...

这个就不好说了。。。
因为我们的样品都是去掉了FBS里面的exosomes。 FBS里面的exosomes的含量还是很高的，应该是配夜里含量的一到两个数量级，不去除的话影响非常大

hzangs · 发表于 2015-12-22 09:40:52

zjm337 发表于 2015-12-21 22:30
你好，这是我新拍的TEM，我感觉和你其他帖子里发的有些相似，你帮我分析分析是不是？？谢谢。。 ...

很不错。你的电镜图可以上figure了

hzangs · 发表于 2015-12-23 15:41:51

子非鱼发表于 2015-12-23 14:23
咿咿...我怎么看不到新的图片....

他那天直接把自己拍的电镜原图发上来了，为了避免被盗用，我把图删掉了。

hzangs · 发表于 2015-12-23 15:42:29

zjm337 发表于 2015-12-21 22:30
你好，这是我新拍的TEM，我感觉和你其他帖子里发的有些相似，你帮我分析分析是不是？？谢谢。。 ...

可以的话请把你的电镜图打一下粗线，之后发上来给大家学习一下谢谢

hzangs · 发表于 2015-12-24 12:06:23

zjm337 发表于 2015-12-24 11:59
请问一下，你买的抗体是在abcam上买的吗？价格好贵啊。。。你们买的货号还有吗？ ...

ALIX 是CST的货号：#2171
TSG101是abcam的货号：# 5377-1

hzangs · 发表于 2015-12-24 16:06:34

zjm337 发表于 2015-12-24 15:37
好的，谢谢！你没有检测CD63吗？

没有去检测这个。 CD63 也是个marker 但是基本上杂两个marker 就可以说明问题了。没有必要杂那么多

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